排出欠損細菌株におけるシングルコピー遺伝子発現を達成するためのエレクトロコンピテントセルの調製

まず、すべての滅菌済み1.5ミリリットルのマイクロチューブと滅菌エレクトロポレーションキュベットを氷上に置きます。次に、摂氏4度で保存した滅菌水のボトルを氷の上に置きます。1.5ミリリットルの細菌培養液を1.5ミリリットルのマイクロチューブの1つに移し、13, 000 Gで2分間遠心分離して細胞をペレット化します。

1ミリリットルのピペットを使用して、細胞ペレットを乱すことなくすべての上清を取り除きます。同じマイクロフュージチューブにさらに1.5ミリリットルの細菌培養を加え、13, 000 Gで2分間遠心分離し、上清を除去します。1ミリリットルの氷冷滅菌水を細胞ペレットに加え、ペレットがマイクロチューブの底に留まらなくなるまで、穏やかなピペッティングで再懸濁します。

再懸濁した細胞を13, 000 Gで2分間遠心分離し、1ミリリットルのピペットを使用して上清を慎重に除去します。最終細胞ペレットを200マイクロリットルの氷冷滅菌水に静かに再懸濁し、最終細胞懸濁液100マイクロリットルを2番目の氷冷1.5ミリリットルマイクロチューブに移します。