トランスフェクションされたHEK293細胞の細胞溶解と免疫沈降のためのタンパク質サンプル調製

HEK 293細胞のトランスフェクションの約48時間後、氷冷PBSで細胞を3回洗浄します。プロテアーゼ阻害剤を含む500マイクロリットルのタンパク質溶解緩衝液を皿に加えます。細胞スクレーパーを使用して細胞を収集し、氷上でのタンパク質吸収の少ないチューブに追加します。

5分ごとにチューブをボルテックスし、氷上で10分間インキュベーションを続けます。サンプルを16、400Gで摂氏4度で10分間遠心分離します。上清を集めて、タンパク質吸収の少ない新鮮な1.5ミリリットルのチューブに移します。

タンパク質濃度を決定した後、200〜1, 000マイクログラムのタンパク質を新鮮なチューブで分離します。タンパク質溶解バッファーを添加して、最終容量を500〜1, 000マイクロリットルに調整します。