精密なランドマークおよび注射技術によるマウスへの腫瘍細胞接種

マウスの毛を麻酔して取り除いた後、オートクレーブ手術マットで包まれた加熱パッドの上に置きます。体をやさしくまっすぐにし、背骨に沿って皮膚を持ち上げます。サージカルマーカーを使用して、テントを張った皮膚の中央にあるマウスの片側に1つの点を描きます。

BXPCを増殖させた後、3つのヒト膵臓癌細胞株を2週間。インキュベーターからフラスコを取り出し、生物学的安全キャビネットに入れます。培地を吸引し、細胞を5ミリリットルのPBSで洗浄します。

5ミリリットルの細胞解離剤をフラスコに加え、5%二酸化炭素と摂氏37度で6〜7分間インキュベートします。細胞懸濁液を15ミリリットルのチューブに移し、500Gで5分間遠心分離します。上清を除去した後、細胞を完全増殖培地に再懸濁します。

ヘモサイトメーターを使用して、細胞濃度と総細胞数を決定します。マウスあたり250, 000個の細胞を含む1.5ミリリットルの懸濁液を遠心分離し、500 Gで5分間接種します。上清を取り除いた後、ペレットを接種するマウスあたり10マイクロリットルのPBSに再懸濁し、チューブを氷上に置きます。

冷やしたピペットチップを使用して、可溶化した基底膜をチューブに加えます。冷やした29ゲージのインスリン針に20マイクロリットルの細胞懸濁液を入れ、シリンジを氷の上に置きます。針をマウスのランドマークポイントに約1センチメートルのコドルを挿入し、針の斜角側を上にして、針をランドマークに到達するまで皮膚の下に移動します。

20マイクロリットルの細胞懸濁液を注入し、45秒間待ってからシリンジを取り出します。マウスを麻酔から外した後、マウスが歩行可能になるまで待ってから、ホームケージに戻ります。