胃癌における多遺伝子SNP検出のための標的配列のPCR増幅とアダプターライゲーション

まず、パラフィン包埋胃がん組織サンプルから抽出した核酸を採取します。カスタムメイドの胃がん多重遺伝子関節検出キットのコンポーネントを氷の上に置きます。成分を十分に混合した後、10秒間遠心分離し、0.2ミリリットルのPCRチューブに試薬を順次加え、ボルテックスにより5秒間混合します。

各反応チューブをサーマルサイクラーにセットし、DNAサンプルとcDNA産物の増幅プログラムを実行します。プライマー消化酵素を氷上で解凍します。各反応チューブに2マイクロリットルのプライマー消化酵素を加えます。

チューブをボルテックスして遠心分離した後、チューブをサーマルサイクラーに置き、分解プログラムを実行します。アダプター接続試薬を氷上で解凍します。1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブにアダプター混合物Xをラベル付けし、必要な成分を追加します。

サーマルサイクラーから消化されたプライマー製品を取り出します。ライゲーション試薬をチューブに加え、5秒間ボルテックスし、2、500Gで低速で10秒間遠心分離します。