胃癌における多遺伝子SNP検出のためのライゲーション産物の精製、増幅およびライブラリー精製

まず、摂氏2〜8度の冷蔵庫からDNA精製磁気ビーズを取り出します。混合後、ビーズを2, 500Gで10秒間遠心分離します。アダプターライゲーション反応生成物を1.5ミリリットルの低吸収マイクロ遠心チューブに移します。

各チューブに45マイクロリットルのDNA精製磁気ビーズを追加します。コンポーネントをボルテックスした後、チューブを10秒間遠心分離し、次にチューブを磁気ラックに3分間置きます。ビーズをピペッティングせずに上清を慎重に捨てます。

次に、300マイクロリットルの75%の新しく調製したエタノールを各マイクロ遠心分離チューブに移します。チューブを180度で4回ゆっくりと回転させます。溶液が澄んだら、ビーズをピペッティングしないようにしながら、上清を速やかに廃棄してください。

次に、チューブをマグネットラックから取り外した後、チューブを短時間遠心分離します。チューブをマグネットラックに置き、残っている液体をピペットで撒きます。1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブのキャップを開け、ビーズを室温で5分間乾燥させます。

PCR関連試薬を解凍してボルテックスした後、試薬を10秒間遠心分離します。マグネットラックから1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブを取り外し、PCR試薬を追加します。ボルテックスチューブを短時間遠心分離して、チューブの壁とカバーに液滴が落ちないようにします。

次に、PCR産物を新しいPCRチューブに移します。サーマルサイクラーでインキュベートし、DNAおよびCDNAサンプルの増幅プログラムを実行します。インキュベーション後、PCRチューブを10秒間遠心分離し、製品を新しい1.5ミリリットルの低吸収マイクロ遠心チューブに移します。

各チューブに25マイクロリットルのDNA精製磁気ビーズを加え、ボルテックスしてよく混合します。チューブを低速で遠心分離し、室温で5分間インキュベートします。次に、溶液が透明になるまでチューブを磁気ラックに3分間置きます。

上清を新しいマイクロ遠心チューブに移し、ビーズをピペッティングしないようにします。300マイクロリットルの75%新たに調製したエタノールをチューブに移し、前に示したように磁気ラックを使用してビーズを2回洗浄します。チューブを短時間遠心分離した後、チューブをラックに置き、残っている液体をピペットで取り出します。

1.5ミリリットルのチューブのキャップを開け、ビーズを室温で5分間乾燥させます。50マイクロリットルの溶離液をチューブにピペットで入れます。チューブをボルテックスした後、短時間の遠心分離を行います。

溶液が透明になるまで、チューブを磁気ラックに3分間置きます。液体を新しいチューブに慎重に移し、ライブラリ名でラベルを付けます。