SARS-CoV-2感染細胞からウイルス粒子を捕捉するためのACE2と磁気マイクロスフェアへの制御抗体の結合

まず、1.5ミリリットルの低タンパク質結合性マイクロフュージチューブ内のMESバッファーにNeutrAvidinのワーキング溶液を調製します。次に、MESバッファー中のヤギ免疫グロブリンGコントロール抗体の作業溶液を調製します。希釈した抗体溶液をボルテックスし、チューブを遠心分離します。

次に、活性化ビーズが入ったマイクロタイタープレートを磁気プレートセパレーターに30秒間置き、ビーズを固定します。マイクロタイタープレートを磁気セパレーターに置いたまま、磁石固定ビーズから上清を吸引します。次に、100マイクロリットルのNeutrAvidin溶液、抗体溶液、およびMESバッファーをビーズを含む適切なウェルに加えます。

マイクロタイタープレートをシールし、室温の暗闇で650 RPMのオービタルシェーカーで2時間インキュベートします。その後、自動洗浄機を使用してPBSTでビーズを洗浄します。一晩インキュベートした後、10ミリモルPBS中の組換えヒトビオチン化ACE2およびビオチンワーキング溶液を調製します。

マイクロスフェアを磁気プレートセパレータ上に30秒間固定化し、前に示すように、磁石固定化されたマイクロスフェアから上清を吸引します。マイクロタイタープレートをマグネティックセパレーターから取り外し、各ウェルに50マイクロリットルの10ミリモルPBSを加えます。次に、100マイクロリットルのビオチン化ACE2とビオチンワーキング溶液を、ニュートラアビジン標識マイクロスフェアを含む適切なウェルに加えます。

マイクロタイタープレートを密封し、前述したようにオービタルシェーカーで1時間インキュベートします。ミクロスフェアを洗浄した後、ACE2とビオチン共役ミクロスフェアを保管してください。