まず、BiochipsモデルBC002をガラス製のシャーレに入れ、すべての空洞を滅菌した70%エタノールで45分間洗い流します。次に、滅菌済みの再蒸留水でキャビティを2回洗い流します。青い先端の1, 000マイクロリットルのピペットを使用して、上部キャビティのバイオチップ膜を滅菌コラーゲンIV溶液でコーティングします。
チップを摂氏37度と二酸化炭素5%で30分間インキュベートします。インキュベーション後、マグネシウムとカルシウムを含む滅菌PBSで下部と上部のチャンバーを2回洗い流します。各空洞の上部チャンバーに250マイクロリットルの内皮細胞またはペニシリンストレプトマイシンを含むEC培地を充填し、下部チャンバーに150マイクロリットルを充填します。
コンフルエントなヒト臍帯静脈内皮細胞培養液を、マグネシウムおよびカルシウムPBSを含まない5ミリリットルのDPBSを含むT25フラスコで洗浄します。PBSに0.25トリプシン1ミリリットルとEDTA1ミリリットルを加えます。そして、摂氏37度で3分間インキュベートします。
インキュベーション後、トリプシン活性を停止するために5ミリリットルのPBSと5%FCSを追加します。50ミリリットルの円錐管で、懸濁液を350Gで5分間遠心分離します。そして、ペレットを1ミリリットルのEC培地に再懸濁します。
10マイクロリットルのトリパンブルー染色液を含むマイクロ遠心チューブに、1〜10希釈した細胞懸濁液10マイクロリットルを加えます。ノイバウアーチャンバーで細胞を手動でカウントします。カウント後、バイオチップの上部チャンバー内の内皮細胞培地を、ヒト臍帯静脈内皮細胞培養の0.4倍10倍を含む200マイクロリットルのEC培地と交換します。
バイオチップを入れたガラスのペトリ皿を摂氏37度、二酸化炭素5%に置きます。上部チャンバーに300マイクロリットルのEC培地、下部チャンバーに200マイクロリットルのRPMI+培地で毎日培地交換を行います。単球を1ミリリットルのPBSで洗浄した後、リドカインとEDTAを含む予熱したPBSで摂氏37度、二酸化炭素5%で7分間インキュベートします。
細胞を回収し、350Gで7分間遠心分離します。1ミリリットルのRPMIに再懸濁した後、前に示したように細胞をカウントします。下部チャンバー内のRPMI+の200マイクロリットルに懸濁した6つの単球の累乗に0.1倍の10を播種します。
バイオチップポートを下に向けて配置し、細胞がメンブレンに付着するようにします。
