iPS細胞由来血液細胞からの核単離のための濃縮生細胞懸濁液の調製

まず、液体窒素から細胞の入ったクライオバイアルを取り出し、摂氏37度の水浴で2分間解凍します。解凍した細胞を15ミリリットルのチューブに移した後、予め温めた培地10ミリリットルを徐々に加え、チューブを遠心分離します。上清を捨て、FBSと塩化カルシウムを含む1ミリリットルの補充されたDPBSに細胞を再懸濁します。

次に、5ミリリットルのポリスチレン丸底チューブに、死細胞除去カクテルとビオチン選択カクテルをそれぞれ50マイクロリットルの細胞懸濁液と混合し、インキュベートします。ボルテックス後、100マイクロリットルのデキストランビーズを細胞懸濁液に加え、ピペットで2回穏やかに混合します。次に、1.3ミリリットルの添加DPBSを混合物に加え、室温で3分間磁石でインキュベートします。

磁石とチューブを反転させて、生細胞懸濁液を新しい15ミリリットルの円錐管に注ぎます。細胞を遠心分離機にインペレットします。上清の大部分を除去した後、0.04%ウシ血清アルブミンを含む1ミリリットルのDPBSに細胞を再懸濁します。