麻酔をかけた動物を手術台に置くことから始めます。手術中の角膜の乾燥を防ぐために、各動物の目に潤滑性の眼軟膏を塗布します。剃った手術部位をポビドンヨードとイソプロパノールを交互に3回繰り返して消毒します。
次に、ペーパータオルのロールまたは直径1.5センチメートルのチューブを、動物の腰まで吻側だけの下に置きます。動物を穴あきドレープで覆い、外科的アクセスのために腰椎の中央に開窓を合わせます。動物の麻酔の深さを確認するには、各足をつまんで、離脱反応がないことを確認します。
次に、11番のメスの刃を使用して、L2椎骨からL6椎骨の正中線に3センチの長さの皮膚切開を行います。次に、筋肉と皮膚の間に滅菌された湾曲した手術用ハサミを挿入し、先端をそっと開いて皮膚を下の筋肉から分離します。L2からL5椎骨の棘突起を覆う筋膜を取り除きます。
AAV9ベクターの25〜35マイクロリットルを滅菌マイクロ遠心チューブのキャップにピペットで入れます。キャップからインスリン注射器にベクターの全体積を引き込みます。次に、動物のL5およびL4棘突起を特定します。
シリンジ針をL5棘突起の左側に配置し、突起の尾側端に合わせます。シリンジ針をL5ラミナを約8ミリメートル前進させ、次にL4ラミナの下を腰槽に進めて、骨と接触するまで進めます。シリンジプランジャーを約5秒間ゆっくりと押し下げます。
次に、挿入部位から針をゆっくりと引き抜きます。4-0縫合糸または外科用ステープルを使用して、傷の一方の端にある切開部を閉じ始めます。染料注入の成功を評価するには、動物を安楽死させた後、棘突起の両側で脊椎に平行な筋肉に4センチメートルの長さの切開を行います。
脊椎鉗子またはハサミを使用して、棘突起の間の筋肉を繊細に取り除きます。ロンゲールを使用して、L6から下部胸椎への棘突起を抽出します。ロンジャーの下端をL5椎弓板の下に挿入し、脊髄を覆っている骨を数回噛むことで整然と取り除きます。
