共焦点顕微鏡法のための幹細胞移植による器官型スライスの免疫蛍光染色

まず、ヒト脊髄由来神経上皮幹細胞(HSCNES細胞)を移植したマウス器官型切片を入手します。インサートメンブレンの底からメディウムを取り出し、予熱したダルベッコのPBSまたはDPBSでスライスを3回洗います。次に、DPBSを吸引し、1.5ミリリットルの予熱した4%ホルムアルデヒドと交換します。

次に、メンブレンの上部に1ミリリットルの4%ホルムアルデヒドを追加します。DPBSで3回洗浄した後、サージカルナイフを使用して、インサートメンブレンを円周方向に切断し、インサートのプラスチック部品からのスライスで分離します。免疫蛍光染色後、200 μリットルの埋込溶液を清潔なスライドガラスに塗布します。

ストレートピンセットを使用して、フローティングメンブレンを35ミリメートルディッシュからゆっくりと持ち上げてカバースリップに移します。続いて、準備したスライドガラスにメンブレンを移します。スライドガラスの膜を、100マイクロリットルの取り付け溶液が入った新しいカバースリップで覆います。

コンフォーカルイメージングに進む前に、暗い化学フードの下で一晩乾燥させます。脊髄組織に移植した造血幹細胞は、30日間安定したGFP発現を示し、良好な生存率を示しました。