TEMサンプル調製のためのレチナールオルガノイド固定と固定後手順

人工多能性幹細胞由来の網膜オルガノイドまたはROの前方固定を開始すること。ピペットを使用して、培養したROの1つをペトリ皿から1.5ミリリットルの微量遠心チューブにゆっくりと動かします。ピペットの助けを借りて、培地を微量遠心チューブから取り出し、1.5ミリリットルの2%パラホルムアルデヒド、2%グルタルアルデヒド固定剤を加えます。

ROが固定されたら、オルガノイドの洗浄に進む前に、パラホルムアルデヒド-グルタルアルデヒド固定剤を取り外してください。オルガノイドを微量遠心チューブに静かに懸濁し、0.01モルPBSを1ミリリットル加えて、完全に洗浄します。次に、残っているPBSをピペットで取り出し、組織ブロックが水没するまで約150マイクロリットルの1%オスミン酸と交換します。

微量遠心チューブを暗い箱に入れます。