透過型電子顕微鏡のための網膜オルガノイド包埋と半薄スライスの位置決め

まず、埋込み金型の溝に純粋なエポキシ樹脂をその体積の3分の2まで追加します。つまようじを使用して網膜オルガノイドを摘み取り、純粋なエポキシ樹脂を備えた包埋型に移します。次に、溝がわずかに突き出ているか膨らむまで、溝を純粋なエポキシ樹脂で満たします。

埋め込み型の両端にあるオルガノイドの位置を調整して、方向性のある埋め込みを行います。埋め込みブロックをサンプル取り付けスタンドに取り付け、Lドライバーでボルトをねじ込みます。次に、ナイフスタンドにガラスナイフを取り付け、ナットを手動で締めます。

目的の領域が露出するまで、余分な樹脂を切り取ります。ガラスナイフのトラフに水を入れます。セミシンミクロトームを用いて、セミシンスライスを1ミクロンの厚さにカットし、針付きの顕微鏡スライド上に置きます。

50マイクロリットルの1%トルイジンブルーを加えて半薄スライスを染色し、加熱プレート上で摂氏95度で1分間インキュベートします。蒸留水で2分間すすぎます。通常の20倍の光学顕微鏡を使用して、切片の構造を観察します。