ヒト腸オンチップモデルのためのヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)の収穫と播種

まず、マグネシウムとカルシウムを含むDPBS中のコラーゲンストック溶液を1〜100希釈して調製します。希釈したストック溶液350μLをそれぞれのチャンバーに加え、室温で5分間インキュベートします。350マイクロリットルのDPBSをマグネシウムとカルシウムと一緒に使用してすべてのチャンバーを2回洗い流し、残りのコラーゲンと酢酸を洗い流します。

一方のサイトからプラグを取り外し、もう一方のサイトと交換します。チャンバーを再度洗い流した後、350マイクロリットルの内皮細胞増殖培地をチャンバーに加えます。一方のサイトからプラグを取り外し、もう一方のサイトと交換します。

次に、350マイクロリットルの内皮細胞増殖培地を各チャンバーに加えます。継代1〜3で培養したHUVECを、内皮細胞増殖培地で80%から90%の細胞密度で培養します。次に、T25細胞培養フラスコから細胞培養培地を取り出し、マグネシウムとカルシウムを含まない3〜5ミリリットルのDPBSで細胞を穏やかに洗浄します。

溶液を取り除いたら、1ミリリットルのトリプシン解離試薬を加え、細胞がフラスコから分離するまで摂氏37度で5分間インキュベートします。マグネシウムとカルシウムを含まないPBS中の5%FBSの9ミリリットルを使用して、分離した細胞をチューブに移します。350Gで室温で5分間遠心分離します。

上清を移動させた後、細胞ペレットを1ミリリットルの内皮細胞増殖培地に再懸濁します。それぞれの量の細胞をチャンバーに加え、加湿インキュベーターでバイオチップを摂氏37度、二酸化炭素5%でインキュベートします。24時間後に、HUVECを含むチャンバーと350マイクロリットルの内皮細胞増殖培地の培地交換を行います。

マイクロ流体バイオチップに気泡が現れた場合は、影響を受けたチャンバーのポート以外のバイオチップのすべてのポートを閉じます。チップを傾けて、気泡をキャビティの一方の端に近づけます。もう一方の端のポートから、反対側のプラグを保持しながら、700マイクロリットルの細胞培養培地をチャンバーに押し込みます。