植物根抽出物のLCMS分析後、データ依存性の製品イオンスキャンを含む、Q1およびQ3スキャンの全イオンクロマトグラムを調べます。トロパンアルカロイド様の特徴を持つ豊富なイオンの親質量を観察します。これには、正に帯電したイオンの質量が500ダルトン未満(通常は偶数)が含まれます。保持時間は2〜22分で、マスターチャージ値に一致するフラグメントはトロパンアルカロイドと一致します。
マスターチャージ124専用のプリカーサーイオンスキャンクロマトグラムまたはチャネルを調べ、保持時間がこの特定のフラグメントを生成するピークまたはイオンを特定します。クロマトグラムをスキャンごとにクリックし、データ依存性のプロダクトイオンスキャンから得られた全MS-MSスペクトル(特に存在量が少ない分子種)を確認します。次に、プリカーサーイオンスキャンクロマトグラムを一緒に分析して、二置換トロパンアルカロイドを示すマスターチャージ 122 と 140、および三置換トロパンアルカロイドを示すマスターチャージ 138 と 156 を調べます。
ニュートラルロススキャンクロマトグラムまたはマスターチャージ160および166のチャンネルを調べます。どのピークまたはイオンが中性損失を引き起こすかを特定し、それらの保持時間を記録します。クロマトグラムをスキャンごとにクリックし、特に存在量が少ない分子種について、データ依存性のプロダクトイオンスキャンのフラグメンテーションと比較します。
プリカーサーイオンスキャンデータとニュートラルロススキャンデータの組み合わせを使用し、データ依存のプロダクトイオンスキャン結果によって裏付けられ、観察されたアルカロイドの推定アノテーションを作成します。最小のトロパン質量から始めて、次に中性損失を追加し、残りの質量を考慮します。アルカロイドのアノテーションを文献で報告されているものと比較し、トロパンアルカロイド置換パターンを決定します。
また、市販の標準品である一般的なトロパンアルカロイドを確かめてご使用ください。Datura metel root 抽出物のフル Q1 スキャンクロマトグラムにより、存在量が異なる多様なトロパンアルカロイドが明らかになりました。マスターチャージ124、122、140、138、および156の特徴は、トロパンアルカロイドの存在を示していた。
これらのトロパンアルカロイドの多くは、アセチル化、チグロイル化、またはフェノール酸または熱帯酸に由来することが、ニュートラルロススキャンクロマトグラムのシグナルによって証明されています。スペクトルデータの利用により、特定のアルカロイドのアノテーションが可能になり、特にマスター電荷224の見かけ質量を持つ化合物を同定することができました。この方法では、化合物構造の断片化パターンと中性損失による化合物構造の推論が可能になり、チグロイル基が置換として存在することが確認されました。
チョウセンアサガオの種子から抽出したメタノール水の検査により、完全な Q1 スキャンベースピーククロマトグラムが得られ、非常に豊富なモノ置換トロパンアルカロイド(おそらくヒヨスチアミン)が同定されました。高分解能のMS-MSスペクトルにより、チョウセンアサガオ(Datura stramonium)種子から新しいアルカロイドを同定することもできます。
