脳研究のための誘導ミクログリア様細胞を得るための全血からの単離

まず、15ミリリットルの密度勾配培地を15ミリリットルの遠心分離チューブに入れ、摂氏20度で1,000Gで1分間回転させます。ヘパリンに採取したヒトの血液が入ったチューブを反転させ、火で滅菌したピンセットを使用して、採血管の蓋を外します。約10〜15ミリリットルの血液をチューブ内の密度勾配培地に分配します。.

遠心分離機の減速レベルを 1 に設定し、血液を入れたチューブを 1, 000 G で室温で 10 分間遠心分離します。バフィーコートの1センチメートル上までプラズマの最上層を取り除きます。.遠心分離チューブから残った上清を、10ミリリットルのPBSを含む別の遠心分離チューブにデカントします。

遠心分離機の減速レベルを3にリセットし、PBSと上清でチューブを遠心分離します。上清を吸引し、チューブを軽くたたいてペレットを緩めます。次に、13ミリリットルの分離培地を遠心チューブに組み込み、内壁を洗浄して細胞を適切に収集します。

火滅菌ピンセットを使用して、100マイクロメートルのセルストレーナーを15ミリリットルの円錐管に配置します。次に、細胞懸濁液を細胞ストレーナーを通して15ミリリットルの円錐管にろ過します。等量の細胞懸濁液を2本の15ミリリットルの円錐管に分注します。

セルを列挙して、アイソレーションバッファーの適切な濃度を計算します。細胞を250Gで4°Cで10分間ペレット化します。上清を取り除いた後、適量のアイソレーションバッファーを加え、ペレットを約20回ピペットで緩めます。