A549-iRFP細胞からの腫瘍接種用3次元多細胞スフェロイドの樹立

まず、ヒト肺腺がんまたはA549 iRFP細胞から3次元多細胞スフェロイドまたはMCSを樹立します。0.3%コラーゲンを添加した100マイクロリットルの完全な増殖培地を使用して、96ウェル超低付着丸底スフェロイドマイクロプレートに細胞を播種します。マイクロプレートを300Gで摂氏4度で7分間遠心分離し、MCSの形成を促進します。

遠心分離後、顕微鏡でスフェロイドの形態を調べ、細胞凝集を確認します。各ウェルの100マイクロリットルの成長培地を、一日おきに新鮮な完全な成長培地と交換します。顕微鏡で観察しながら、丸い形をしていて全体的に縁が滑らかですが、出芽が粗い5〜10個、直径が適切なスフェロイドを選びます。

iRFP蛍光を測定して、平均の1標準偏差以内の蛍光シグナルを持つMCSを選択します。