適切に麻酔をかけたマウスで、痛みを軽減するために塩酸ブプレノルフィンを皮下に注射することにより、外科的処置を開始します。眼科用軟膏を目に塗布して乾燥を防ぎます。マウスを背側の姿勢に置き、手足を伸ばした位置にテープで固定します。
ヨウ素とアルコールの綿棒を交互に、それぞれ少なくとも3回使用して、背中の皮膚を消毒します。次に、手術用ハサミを使用して、動物の左側を0.5〜1センチメートル切開します。鉗子を慎重に使用して、胸壁と肺の動きが見えるまで筋肉と脂肪組織を分離します。
ピペットを使用して、選択した1つの多細胞ステロイド(MCS)をマイクロプレートから氷冷PBSを含むガラスシャーレに移します。20マイクロリットルのガラス製シリンジに100ゲージの針を取り付け、氷の上で予冷します。次に、PBSとマトリゲルの予冷混合物を20マイクロリットル引き出します。
シリンジを使用して、ペトリ皿から1つのMCSを最小量のPBS-マトリゲル混合物ですばやく吸引し、スフェロイドを針の金属部分に保ちます。針を2つの肋骨の間に垂直に約3ミリメートルの深さまで静かに挿入し、吸引されたMCSを含む混合物の20マイクロリットルすべてをゆっくりと注入します。次に、針を慎重に取り外します。
傷口に三重の抗生物質軟膏を塗ります。切開部をサージカルクリップで密封し、2週間後に取り外すようにします。動物を赤外線ヒートパッドの上に置き、体温を維持するために実験室用ワイプで覆います。
動物が目を覚まし、適切に動くまで、少なくとも30〜60分間動物を監視します。700ナノメートルチャネルの小動物イメージングシステムを使用して、麻酔をかけたマウスの腫瘍異種移植片からのIRFP蛍光シグナルを3〜4日ごとに測定します。左、右、背側、腹側の4つの姿勢で蛍光を測定します。
左側と腹側の両方からの正味の蛍光強度は、腫瘍進行の同様の傾向を示し、腹側からの蛍光は左側からの蛍光よりもわずかに遅く成長しました。
