マウス胚培養と石川細胞への接着による子宮内膜受容性の探索

まず、交配したばかりの雌マウスから胚を取得します。35mmのシャーレの底に12個のPotassium Simplex Optimized Mediumの微小液滴を準備します。微小液滴を3〜5ミリリットルの鉱油で覆い、ペトリ皿を摂氏37度のインキュベーターに5%の二酸化炭素を入れて平衡化します。

トランスファーピペットを使用して、マウス胚をM2培地からKSOM培地に移します。調製したKSOM微小液滴に洗浄した胚を入れ、5%二酸化炭素と摂氏37度で4日間インキュベートします。サイズ、細胞内部の質量、栄養膜細胞の数、増殖の程度に応じて有利な胚盤胞を選択します。

1ミリリットルの2%ゼラチンを12ウェル培養プレートに加え、摂氏37度で30分間インキュベートします。次に、余分なゼラチンを吸引し、プレートの底を完全に乾かします。ヒト子宮内膜腺癌細胞または石川細胞をゼラチンコーティングした12ウェルプレートに播種し、プレートを24時間インキュベートします。

細胞を含む12ウェルプレートの各ウェルに、5〜15個の新鮮な胚盤胞を静かに入れます。48時間後、顕微鏡で胚を観察し、プレートを3回動かした後の付着状態を評価します。付着していない胚は、細胞の表面を浮かんだり転がったりします。

最後に、さまざまなエストロゲン濃度の存在下での胚着床率を計算します。その結果、生理学的濃度に近い17β-エストラジオールは、17β-エストラジオールを含まない対照と比較して、胚の着床率が増加することが示されました。しかし、100ナノモル付近の超高濃度の17β-エストラジオールは、胚の着床率を有意に低下させました。