治療試験のための膵管腺癌デスモプラスラを模倣した3D共培養スフェロイドの調製

まず、PANC-1細胞培養物を入手し、9ミリリットルのハンク平衡塩溶液で細胞を3ミリリットル刻みで洗浄します。細胞を2ミリリットルのトリプシンで約10分間インキュベートします。懸濁液を中和するには、10%FBSを添加したDMEMを3ミリリットル追加します。

細胞を1ミリリットルの培地刻みで7回洗浄した後、中和された各アリコートを15ミリリットルのチューブに集めます。同様に、トリプシン中和溶液と星状細胞培地を使用して、トリプシン化ヒト膵臓星状細胞(HPaSteC)を取得します。11ミリリットルのDMEMに必要量の両方の細胞懸濁液を10%FBSと混合し、泡の形成を回避します。

100マイクロリットルの細胞懸濁液混合物を培養プレートに静かに分注し、5%の二酸化炭素と摂氏37度でインキュベートします。3日目に、10%FBSを含む50マイクロリットルのDMEMをウェルの側面に沿って各ウェルに追加します。10日目または11日目に、ハロー近くの溶液を乱さずに使用済み培地を吸引し、各ウェルの側面に沿って100マイクロリットルの新鮮な培地を追加します。

14日目または17日目に、1ミリリットルのピペットを使用して、ハローに達するまで各ウェルから培地を取り除きます。プレートをフードの背景に合わせ、下部に回転楕円体を配置します。スフェロイドの近くに約50マイクロリットルの培地を静かにピペットで動かし、スフェロイドが溜まるのを妨げます。

14日目に得られたスフェロイドは、平均体積0.048立方ミリメートルまで成長することがわかった。