臍帯からのウォートンゼリー由来間葉系幹細胞(WJ-MSC)の単離と培養

まず、すべての滅菌手術器具を作業プラットフォームに置きます。バイオセーフティキャビネットで、以前に採取したヒトの臍帯が入ったチューブの表面を75%エタノールで消毒します。サンプルをシャーレに入れます。

結び目のあるサンプルを75%エタノールに30秒間浸します。次に、新しいペトリ皿で、滅菌PBSでサンプルを複数回すすぎます。手術用ハサミと鉗子を使用して、結び目を切り取り、次に2つの結び目の間のコードを横方向に短い部分に切ります。

1ミリリットルのピペットを使用して、コードのもう一方の端から出てくる液体が完全に透明になるまで、PBSで静脈を灌流します。すでに切断されたへその緒片の1つを新しいペトリ皿に移します。適切な量のPBSを追加して、操作中ずっとコードを濡らし続けます。

鉗子でコードをつかみ、蚊クランプを使用してその主軸に沿って動脈を引き抜きます。太い面を上にしてコードを水平に固定するには、鉗子の片方の刃を臍帯静脈に挿入してしっかりと固定し、鉗子が太い面で固定されるようにします。メスを使用して、鉗子のもう一方のブレードの端に沿って、羊膜上皮層の一方の端からもう一方の端まで直線的な切開を行います。

切断ギャップの角から、歯のクランプで羊膜上皮の角を持ち上げ、上皮の内面に沿って角膜ハサミでさらに水平に少し切断し続けます。ウォートンゼリーと羊水上皮をクランプで分離し、へその緒の一方の端の円全体に徐々に拡大します。上皮層を縦に剥がします。

鉗子の両方のブレードを静脈の内側に挿入します。ウォートンのゼリーの一部をクランプし、次に裏返して臍帯静脈の上皮を露出させます。静脈の上皮を簡単に剥がします。

集めたウォートンゼリーをラベル付きの90mmシャーレに入れ、ハサミと鉗子で1〜3mmに切ります。底にキャップを付けて皿をひっくり返し、摂氏37度の5%二酸化炭素インキュベーターに30分間置きます。ヒト間葉系幹細胞培養培地を3日ごとに交換します。

従来のアプローチと比較して、独自の鈍的解剖手順により、ウォートンゼリーの収量が大幅に増加しました。両方の方法によるウォートンゼリー間葉系幹細胞の総量を数えることによるさらなる分析は、継代数の増加に伴う細胞量の顕著なギャップを示した。新しい方法における間葉系幹細胞の増殖速度は、2日後に有意に高かった。