病原性Th17細胞のマウスナイーブCD4⁺ T細胞へのin vitro誘導

まず、プレコートされた24ウェルプレートからPBSを取り出します。濃縮したマウス脾臓ナイーブCD4+T細胞をTh17細胞培養培地に再懸濁し、抗CD3でプレコートした24ウェルプレートの異なるウェルに分注します。Th0細胞培養培地、古典的非病原性Th17培地、および造影剤用の古典的病原性Th17培地をプレートの残りのウェルに加えます。

各ウェルに1マイクロリットルの抗CD28溶液を加えます。5%二酸化炭素インキュベーターで細胞を摂氏37度で5日間培養します。2日目に、細胞培養上清培地の半分を新鮮な培地と交換します。

5日目に光学顕微鏡で細胞を観察します。各グループから細胞上清を採取し、摂氏80度で凍結保存します。ナイーブCD4+T細胞をTh0培地とTh17分化培地で5日間培養したところ、T細胞は両方の培地でクラスター増殖を示しました。

フローサイトメトリー解析の結果、ナイーブCD4+T細胞の90%が、新しいTh17細胞培地の刺激下で病原性Th17細胞に正常に分化したことが明らかになりました。