まず、AFMのカンチレバーホルダーをカンチレバー交換スタンドに固定します。時計メーカーの鉗子を使用して、選択したカンチレバーをホルダーに取り付けます。ホルダーのネジを締めて、カンチレバーを固定します。
スタンドに置かれているAFMヘッドにカンチレバーホルダーを置き、ロックします。AFMソフトウェアのステップモーター機能を使用して、AFMヘッドを最高点まで引き出します。をクリックし、その位置を 0.0 に設定します。
AFMヘッドをスタンドから慎重に持ち上げ、脚をそれぞれのスロットに配置してサンプルステージに取り付けます。カンチレバーを校正するには、ステップモーター機能を使用してサンプル表面に近づけます。次に、Contact Mode for SpectroscopyウィンドウでApproachをクリックします。
カンチレバーを15マイクロメートルの小さな増分で降ろします。Acquireを押して、フォースカーブをキャプチャします。次に、フォースカーブを選択し、Calibration Managerウィンドウで開き、MethodセクションでContact-Based Modeを選択します。
次に、適合範囲の選択機能を使用して、線形曲線フィットの片持ち梁引き込み曲線を選択します。次に、[感度]チェックボックスをオンにして、力の単位をボルトからニュートンに変換します。液体中でカンチレバーを100〜200マイクロメートル持ち上げ、熱ノイズ機能を選択します再度、[適合範囲の選択]をクリックし、熱ノイズベル曲線をローレンス曲線に適合させます。
カーブフィッティングの後、スプリング定数Kボックスを選択します。ばね定数がメーカーの値に近いことを確認し、後で参照できるようにメモしておいてください。次に、スライドマウントされたげっ歯類の眼の網膜血管または内皮下マトリックスのサンプルをAFMステージに置き、網膜血管を視覚化します。
ソフトウェアの実験セクションで[Contact Mode for Spectroscopy]を選択します。次に、設定点の力を0.5ナノニュートンに設定し、[アプローチ]をクリックします。AFMステージのステージネジを使用して、カンチレバープローブをサンプル上の目的の位置に慎重に配置します。
「アプローチ」をクリックしてカンチレバーをサンプルに近づけて配置し、「取得」をクリックして力曲線を捕捉します。最後に、解析のためにすべての力曲線を保存します。糖尿病マウスから単離された網膜毛細血管から得られたアプローチ曲線と収縮曲線は、非糖尿病マウスから得られた曲線よりも急でした。
