肺微小血管密度を評価するためのイソレクチンB4染色のためのマウス肺組織切片の準備

まず、マウスの肺組織を、組織の体積の10倍である4%パラホルムアルデヒドに入れます。3時間の固定後、5つの肺葉を分離し、右肺の頭蓋葉、中葉、および副肺葉を別々に埋め込み、垂直葉と気管支の接続の方向に向けます。次に、右肺の尾葉を肺-葉-気管支の接続に垂直な方向に左から右に4ミリメートルで2つに切断し、切断面を上に向けてワックスブロックにスライスを埋め込みます。

左肺葉に3つの切り込みを入れるには、主気管支接合部の上で横方向に切り込み、上部から2ミリメートル下に切り込みます。2番目のカットは、メイン気管支接合部の横方向、上部から5ミリメートル下に行います。ローブの端、上部から8mm下に3番目のカットを行います。

一番上のティッシュを捨てた後、残りの3つのピースをワックスブロックに包み、切断面を上に向けてください。再固定後、ティッシュブロックを流水で15分間すすぎます。組織を漸増するエタノール濃度に順次浸し、続いてキシレンとソフトワックスを浸します。

金型に適量の流動パラフィンを充填し、鉗子を使用して、組織を中央の埋め込みフレームに配置します。型とティッシュを埋め込み機の凍結領域に置きます。パラフィンがわずかに白くなり始めたら、覆われていない埋め込みフレームを金型の上にすばやく配置し、2回目のワックス注入を実行して、埋め込みフレームの下部にある穴を塞ぎます。

次に、金型全体を冷凍テーブルに移します。ワックスブロックをスライサーに固定した後、ブロックをトリミングして、滑らかで平らな切断面を明らかにします。ミクロトームのホイールクランクを回転させて、厚さ4マイクロメートルのスライスをカットします。

取り外した部分を順番に水面に滑らかに置きます。セクションが完全に伸びたら、各セクション間の接合部で壊れたピースを分離します。セクションの下にスライドガラスを傾け、接触したら、垂直にスライドをゆっくりと均等に水面から持ち上げます。