イソレクチンB4およびDAPIによるマウス肺組織切片の染色による肺微小血管密度の可視化

まず、マウス肺組織のパラフィン包埋スライスを取得し、摂氏65度のオーブンに60分間置きます。染色のために、スライドを組織切片と共に、適切な溶液を含む染色ジャーに順次浸します。修飾クエン酸ナトリウム抗原賦活化溶液を脱イオン水で50倍に希釈します。

抗原抽出物をマイクロ波で高出力で予熱した後、スライドを15分間沸騰させます。スライドが室温に冷えたら、PBSで2回、それぞれ5分間洗浄します。次に、0.25%トリトンで組織を2回、各10分間透過化します。

免疫組織化学ペンで組織を囲み、スライドを5%BSAと室温で1時間インキュベートします。次に、イソレクチンB4またはIB4を1%BSAで1:50の比率に希釈します。余分な水分を取り除いた後、希釈したIB4の50〜100マイクロリットルと組織切片を摂氏4度で一晩インキュベートします。

スライドをPBSで3回、各5分間洗浄し、0.25%トリトンで10分間透過処理します。次に、組織切片を50〜100マイクロリットルのDAPIで室温で5分間インキュベートします。PBSを3回洗浄した後、光に当たらないように、退色防止封入剤をスライドに一滴塗布します。

風乾スライドを蛍光顕微鏡の下に取り付けて、核とターゲットシグナルの画像をキャプチャします。このプロトコルは、IB4を使用して肺微小血管系の正確な局在化と観察を可能にし、蛍光顕微鏡下で異なるマウス肺葉の微小内皮細胞を染色することができます。