溶媒除去されたヒト心臓組織の強化された3D共焦点イメージング

まず、メスを使用して4%パラホルムアルデヒドで固定されたヒト心臓組織を解剖し、共焦点顕微鏡検査のためにチャンバー内に収まるようにします。段階的なメタノールシリーズで心臓標本を室温でそれぞれ1時間ずつ攪拌しながら脱水し、続いて66%ジクロロメタンと33%メタノール溶液に一晩攪拌して浸漬します。翌日、指示された手順を実行してサンプルを漂白します。

次に、攪拌しながら、段階的なメタノール系列で試料をそれぞれ1時間再水和します。免疫標識後、以下の手順を実行して、イメージング用の組織を調製します。スライドに接着剤の入ったチャンバーを貼り付け、チャンバーの周囲にマニキュアを塗布します。

5Xレンズを装備した正立型レーザー走査型共焦点顕微鏡の電源を入れます。使用する蛍光色素の発光スペクトルに適したレーザーラインを使用して、1024×1024の解像度でTileスキャンとZスタック画像を取得します。マイクロスケールレベルでは、心臓サンプルの組織透明化により、心臓ニューロンを含む神経節の視覚化と心筋神経支配の神経パターン化が可能になります。