脳障害に対する免疫応答を研究するためのマウスCalvariaからの骨髄単細胞懸濁液の調製

マウスの頭蓋骨から骨髄単細胞懸濁液を調製するには、解剖顕微鏡下で、鈍い鉗子を使用して単離された頭蓋骨から硬膜を慎重に剥がします。氷上に保たれたPBSが入った皿にカルバリアを置き、1ミリリットルのピペットを使用してすすぎ、表面から血液の残留物を確実に除去します。カルバリアを、それを浸すのに十分な新鮮な冷たいPBSを含む新しい皿に移します。

滅菌ハサミを使用して、冷たいPBSでカルバリアを約3ミリメートル×3ミリメートルの断片に切断します。18ゲージの針を使用して、500マイクロリットルの微量遠心チューブの底に穴を開けます。このチューブを、20マイクロリットルの冷たいPBSが入った1.5ミリリットルの微量遠心チューブに挿入します。

次に、カルバリアフラグメントを500マイクロリットルチューブに移します。セットアップを 10, 000 g で 30 秒間、摂氏 4 度で遠心分離します。採取した頭蓋骨髄細胞を500マイクロリットルの赤血球溶解緩衝液に再懸濁し、室温で30秒間インキュベートします。

懸濁液を4ミリリットルの冷たいPBSが入った15ミリリットルの遠心分離チューブに移します。400 gで摂氏4度で6分間遠心分離します。5ミリリットルの冷たいPBSでもう一度洗います。

最後に、細胞口蓋を適切なバッファーに再懸濁します。