先端バイオ肥料開発のための根圏試料からの多種バイオフィルムの構築

まず、キュウリの種を入手し、75%エタノールで消毒し、続いて2%次亜塩素酸ナトリウム溶液で消毒します。種子を滅菌水ですすいだ後、滅菌条件下で発芽させます。一貫して発芽した2枚の葉の段階の苗木を、2キログラムの黒い土が入った鉢に移植します。

苗が四つ葉の段階に達したら、鉢を反転させ、滅菌した手袋を使用して、厚さ2ミリメートルの根圏土壌とともに根を分離します。根を50ミリリットルの遠心分離管内の30ミリリットルのPBSSバッファーに入れます。チューブを20分間振とうし、懸濁液を100μmのナイロンセルフィルターでろ過して、根や大きな沈殿物を取り除きます。

濾液を別の50ミリリットルの遠心分離管に移し、室温で15分間3、200Gで遠心分離します。根圏土壌細菌細胞を抽出する前に、チューブを摂氏4度で一時的に保管します。