まず、エージング後にサンプルマウントされたスライドを入手します。スライドを前処理するには、指定された時間、適切な溶液が入ったコプリンジャーにスライドを連続して浸します。100〜200μLのプロテイナーゼK消化バッファーで組織を消化し、室温で1分間インキュベートします。
消化を停止するには、すぐにスライドをエタノール溶液に2分間連続して浸します。FISHハイブリダイゼーションミックスをスライドに塗布し、サンプルをカバースリップで覆います。スライドを、摂氏75度のスライドモートハイブリダイゼーションシステムなどのホットプレートに2〜5分間置きます。
次に、スライドを摂氏37度に設定された別のホットプレートに移して、一晩でハイブリダイズします。次に、スライドを温かい洗浄バッファーに浸し、カバースリップを慎重に取り除きます。スライドは、暗所で適切な試薬を使用して洗浄し、染色します。
スライドを脱イオン水に1秒以内すばやく浸し、ペーパータオルの上に置きます。乾燥後、スライドを退色防止封入剤で取り付けます。カバースリップを置き、マニキュアで密封してからイメージングします。
60倍オイルレンズを使用して、複数のZスタックで蛍光シグナルを捕捉します。最後に、最高の解像度を達成するために最大の3D投影を実行し、デコンボリューションまたはその他の背景クリアリングアルゴリズムを適用します。トリプルネガティブ乳がんサンプルでは、核FISHは主に核ごとに2つの異なるドットを示し、これは彼女の2つのERBB2シグナルを表しています。
対照的に、HER2陽性サンプルは豊富なFISHシグナルを示し、遺伝子増幅のパターンが異なることを示しています。さらに、HER2陽性サンプルの一部の核はクラスターを示すことがあり、これは遺伝子増幅の増加の焦点である余分な染色体DNAハブを示唆しています。
