磁性ナノ粒子、抗マイクロRNA 10b注射の24時間後、マウスの体重を量り、1キログラムあたり150ミリグラムの投与量で投与するd-ルシフェリンの量を計算します。溶液を直接光から保護するボリュームの28ゲージシリンジを準備します。麻酔をかけたら、手術部位をさらに傷つけないようにマウスをそっと首筋にし、d-ルシフェリンの用量を腹腔内に注射します。
マウスが回復するのを待ち、10分間待ってからイメージングします。in vivoイメージングシステム(IVISスキャナー)を調製した後、黒色の低蛍光マットをイメージングステージに置き、ノーズコーンアレイをイメージング用に構成します。ソフトウェアで、[イメージング ウィザード]をクリックします。
次に、バイオルミネッセンスイメージングを選択し、続いてオープンフィルターを選択します。次の画面で、撮影対象と視野を選択します。麻酔をかけたマウスをIVISスキャナーの腹臥位に置きます。
[Acquire sequence] をクリックし、最小シグナルしきい値 3000 カウントの自動露光設定を使用して、ルシフェラーゼ標識 U-251 膠芽腫細胞の局在化の画像をキャプチャします。次に、イメージングウィザードで蛍光を選択し、続いてエピ照明でフィルタリングされたペアを選択します。次の画面で、プローブ Cy5.5 を選択します。
撮影対象と視野を選択します。最小信号閾値が 6, 000 カウントの自動露光設定を使用して、磁性ナノ粒子、抗マイクロRNA 10b の局在化のための画像をキャプチャします。麻酔をかけたマウスをMRIベッドにうつ伏せにします。
バイトバーとイヤーバーを使用してスキャンするために頭を固定して配置します。潤滑された直腸温度プローブを取り付け、呼吸と温度監視が機能していることを確認します。マウスベッドのペグをコイルの穴にはめ込んでマウスブレインコイルを頭の上に置き、スキャン中の動きを減らすためにコイルを所定の位置にテープで固定します。
体温を維持するために、マウスの上部に小さな温水循環パッドを置きます。マウスとイメージングベッドをスキャンの位置に移動します。集録ソフトウェアで、ウォブルセットアップステップを開始して、MRIコイルを調整し、一致させます。
トレースが中央に配置され、できるだけ深くなるようにします。脳の3平面ローカライザースキャンを取得します。次のパラメーターを使用して、2 次元 T2 強調スキャンを取得し、腫瘍を検出します。
全脳のb0マップを取得し、map shimユーティリティを使用してローカライズされたshimを計算します。3次元T2星型画像を使用して、ナノ粒子を視覚化します。次のパラメータを使用して、2次元T2強調画像を基準として使用して、スキャンを腫瘍上に配置して、さらにナノ粒子イメージングするためのT2スターマップを取得します。
5ミリ秒のエコー時間間隔で10枚のポジティブエコー画像を取得します。実験エンドポイントで、マウスの体重を量り、1キログラムあたり150ミリグラムの投与量で投与するd-ルシフェリンの量を計算します。前述のように、注射後10分でライブ生物発光イメージングを実施します。
安楽死させたマウスから切除された脳を入れたペトリ皿をIVISスキャナーに入れます。.生体発光モダリティと蛍光モダリティの両方で、in vivoイメージングと同じ取得設定を使用して脳をイメージングします。磁性ナノ粒子抗microRNA 10bを注入したマウスのCy5.5蛍光および生物発光シグナルは、腫瘍へのナノ粒子の送達を示す明確な共局在を示したが、対照マウスは蛍光シグナルを示さなかった。
ex vivo蛍光イメージングにより、肝臓や腎臓などの主要なクリアランス臓器におけるナノ粒子の局在が示されました。T2強調MRI信号の特徴的な減少は、磁性ナノ粒子、抗マイクロRNA 10bがMRI造影剤として血液脳関門を通過し、腫瘍領域に蓄積する可能性を示しています。
