まず、安楽死させたマウスにXiaoyaoの錠剤を注射したワックスブロックを準備します。ワックスブロックを6マイクロメートルの厚さの連続セクションにカットし、スライスを摂氏70〜72度で30〜60分間焼きます。スライスを脱ワックス溶液に8分間移し、次に75%無水エタノールで2回、それぞれ5分間脱水してから、PBSで5分間すすぎます。
次に、EDTA高圧修理を15分間実行します。PBSですすいだ後、3%の過酸化水素を組織に滴下し、10分間インキュベートします。ティッシュをPBSで3回、それぞれ5分間洗浄します。
免疫組織化学ペンを使用して、組織の周りに円を描きます。PBSで組織を洗浄した後、一次抗体溶液で一晩染色します。翌日、PBSでティッシュを3回、各5分間すすぎます。
二次抗体をドロップワイズで添加し、60分間インキュベートします。PBSですすいだ後、DABのすぐに使用できる溶液で組織を3〜5分間インキュベートします。次に、組織をヘマトキシリンで3分間染色します。
再度、組織をPBSですすいでから、分化溶液に10秒間入れます。PBSすすぎ後、リターン溶液を10秒間加えます。最後に、75%無水エタノール処理を5分間行い、スライドを中性樹脂で密封します。
ヘマトキシリン-エオシン染色は、偽マウスで小柱が密集して配置されていることを示しましたが、OVXマウスは、小柱がまばらで骨髄空洞が拡大した典型的な骨粗鬆症の変化を示しました。マイクロCTの比較では、OVXマウスでは偽マウスと比較して、不完全な海綿網の働きと骨皮質の菲薄化が示されました。薬物介入後、ヘマトキシリン-エオシン染色は、OVX群と比較して線維柱帯構造の回復と骨髄腔の減少を示しました。
イメージングインデックスは、OVXグループと比較して、高用量のXiaoyao錠剤グループで小柱骨の骨折と網状化の回復が少ないことを示しました。.免疫組織化学の結果は、薬物群でアルカリホスファターゼとコラーゲン1型の増加と、インターロイキン17、ACT1、およびインターロイキン6の減少を示しました。
