マラリアにおける薬剤耐性と闘うためのクローン性トランスジェニック マラリア原 虫を得るための限界希釈

まず、薬物処理された熱帯熱マラリア原虫から単離された目的の遺伝子の配列を確認します。寄生した赤血球を希釈した後、適切な量を添加して、10ミリリットルの培地中に合計50の寄生虫を達成し、2%ヘマトクリットを確保します。次に、50種類の寄生虫を含むこの培地を100マイクロリットルを96ウェルプレートの各ウェルに加えます。

プレートを混合ガスで洗い流した気密性の高いセカドールに置きます。そして摂氏37度でインキュベートし、2日ごとに培地を補充します。寄生虫が現れるまで、7日ごとに2%ヘマトクリットを含む完全なRPMIにメディアを交換してください。.

96ウェルプレートを45度の角度に傾けて、赤血球が落ち着くようにします。マルチチャンネルピペットを使用して、各ウェルから培地を慎重に取り出します。寄生虫を含むウェルでは、黄色または濃い赤への色の変化を観察し、寄生虫のないウェルの培地のピンク色とは対照的です。

次に、色の変化を示すウェルから少量の培養物を取り出し、標識スライド上に塗抹標本を調製します。ギムザ染色を行った後、顕微鏡でスライドを観察します。寄生虫が観察された井戸の内容物をT25フラスコに移し、寄生虫を4〜5日間成長させるためにインキュベートします。

寄生虫症が2〜3%に達すると、500マイクロリットルの寄生虫培養物を溶解します。そして、寄生虫遺伝物質を抽出します。