新生児マウスの脳由来の混合グリア培養物の調製と維持

まず、分離された脳を滅菌済みの使い捨てメスの刃で約1平方ミリメートルの断片に刻みます。細かく刻んだ脳を新しい滅菌50ミリリットルチューブに慎重に移します。0.25%トリプシンの最終濃度をミンチした脳に加えます。

組織を摂氏37度の水浴で20分間インキュベートします。5ミリリットルの完全グリア培養培地を加えてトリプシンを中和し、10ミリリットルのピペットを使用して組織懸濁液を穏やかに混合します。細胞懸濁液を細胞ストレーナーを通して慎重にデカントします。

次に、滅菌済みの1ミリリットルシリンジからプランジャーを取り外し、プランジャーを使用して組織をメッシュに粉砕します。グリア培養培地を含む1〜2個の脳を含む等量の細胞懸濁液を各フラスコに加えると、最終容量は15ミリリットルになります。1日目には、まばらな細胞と過剰な細胞破片が観察されました。

4日目までに、付着性アストロサイトが生成されました。典型的なアストロサイト形態を持つコンフルエント細胞は、培養の8日目までに観察されました。