ミクログリア-ニューロン相互作用研究のための初代ニューロンとミクログリアの共培養

まず、T25フラスコで成長したニューロンを共培養します。トリプシンを含み、Dnase I.Addの胎児のウシの血清の0.5ミリリットルを含んでいるverseneの解決の5ミリリットルと媒体を取り替えてトリプシンおよびDnase I.Transferの細胞を15ミリリットルの円錐管に中和する。フラスコを5ミリリットルの完全な神経基礎培地で一度洗って、収集されたニューロンを最大化します。

次に、細胞懸濁液を300 Gで摂氏4度で5分間遠心分離します。上清を捨てた後、細胞ペレットを2〜3ミリリットルの完全神経基礎培地に穏やかに再懸濁します。各ウェルに100マイクロリットルの細胞懸濁液を播種して、ウェルあたり75, 000ニューロンを取得し、8〜10日間の混合グリア栽培を行います。

10ミリリットルのピペットを使用して、T75フラスコをグリア培養培地で優しく洗浄してミクログリアを採取し、細胞と培地を滅菌済みの50ミリリットルの円錐管に移します。細胞コレクションを300 Gで摂氏4度で5分間遠心分離します。上清が除去されたら、ペレットを2ミリリットルの完全神経基礎培地に穏やかに再懸濁します。.

96ウェルニューロン培養プレートから、100マイクロリットルの神経基礎培地を取り出し、1ミリリットルの細胞懸濁液あたり250,000細胞の100マイクロリットルを追加します。共培養では、ニューロンと神経突起の上部または間に丸いミクログリアと大きなミクログリアが観察されました。