ボリューム電子顕微鏡を用いた光受容体シナプス研究のための網膜サンプルの埋め込み

まず、マウスから網膜ストリップを採取し、0.1モルのカコジル酸ナトリウム緩衝液で15分間5回洗浄します。次に、ストリップをフェロシアン化カリウムおよび四酸化オスミウム溶液と暗所で氷上で1.5時間インキュベートします。ストリップを二重蒸留水で3回洗浄し、1%チオカルボヒドラジドとインキュベートします。

二重蒸留水ですすいだ後、網膜ストリップを四酸化オスミウム、酢酸ウラニル、および硝酸鉛で順次処理します。エタノールの濃度を増やして網膜ストリップを脱水します。次に、網膜ストリップを等量のエタノールとアセトンを含む溶液で20分間処理し、続いて2回のアセトン洗浄をそれぞれ20分間行います。

網膜ストリップをアセトン樹脂混合物中で室温の暗所で順次インキュベートします。網膜ストリップに純粋な樹脂を45°Cで24時間浸潤し、続いて60°Cで48時間新鮮な樹脂を浸潤させます。この方法を用いた網膜光受容器終末の集束イオンビーム走査型電子顕微鏡法は、従来の二重固定法よりも細胞膜の構造と小胞の輪郭をより明確に保持します。