まず、成体の雌の虫を含む培養プレートをインキュベーターから取り出します。彼-5ワームを同期させた後、M9バッファーでワームを5回洗浄します。生後1日の成体オスを播種プレートからM9バッファーを含むチューブに移します。
シーディングされていないNGMプレートに線虫を載せて、残留細菌を除去し、アッセイ中の食物からの干渉を防ぎます。1.5%オーガー、25ミリモル塩化ナトリウム、1.5ミリモルトリス塩基、および3.5ミリモルトリス塩酸塩を含むケモアトラクションアッセイプレートを調製します。オーガーを化学吸引溶液中のマイクロ波で完全に溶解するまで加熱します。
冷却後、ピペットを使用して、chemoattractionオーガー溶液をペトリ皿に均等に分配します。オーガーの表面が少し乾くまで、蓋を清潔な場所で開いたままにしておきます。表面が適度に乾いたら、フタを閉めます。
ケモアトラクションアッセイを行うには、蓋とペトリ皿の下側に3つの異なるスポットをマークします。2マイクロリットルの1モルアジ化ナトリウムをプレート上の各実験スポットおよびコントロールスポットに適用します。ワームピッカーで健康で自由に動くオスのワームを20匹選びます。
解剖顕微鏡下で、開始点でワームを放出します。コントロールスポットに2マイクロリットルのM9バッファーを、蓋の実験スポットに2マイクロリットルの性フェロモンをすばやく追加します。蓋をそっと閉め、プレートを静かで温度が安定した場所に置きます。
30分後、各スポットの線虫の数を数えてアッセイを採点します。走化性の評価を強化するには、カメラを使用して線虫の軌跡を記録します。him-5雄の走化性指数は一貫して0.5を超えており、性フェロモン源に強い魅力があることを示しており、SRD-1雄の走化性指数はほぼゼロであった。
成功した化学吸引アッセイでは、him-5のオスが時間の経過とともにフェロモン源に近づき、時間、距離、速度、真直度、および方向の正確さを色分けした軌跡で示されました。
