形質蛋白質局在の研究のための植物葉の農業浸透

まず、Nicotiana benthamianaの種子を、摂氏23度に設定された制御された環境チャンバー内の湿った土壌で育て、16時間の光を維持し、その後8時間の暗闇を維持します。生後2週間の苗を大きな鉢に移した後、同じ条件で4〜5週間育てて、農業浸透実験の準備をします。アグロバクテリウムを、目的のベクターを含むMephasins EHA105細胞にLB寒天プレート上にストリークし、摂氏28度でインキュベートします。

2日後、プレートから1つのコロニーを2ミリリットルのLBブロスに移し、毎分250回転で攪拌しながら摂氏28度で一晩インキュベートします。次に、一晩培養から1ミリリットルを取り出し、同じ条件下で1時間再培養するために4ミリリットルの新鮮なLBブロスを追加します。遠心分離により細胞をペレット化します。

その後、600ナノメートルで細菌懸濁液の細胞数を決定し、浸潤バッファーを使用して光学濃度を0.1または0.2に調整します。細菌懸濁液を室温で3時間、穏やかに攪拌しながらインキュベートします。次に、1ミリリットルの無針使い捨て注射器を使用して、さまざまな植物から完全に拡大した葉の軸方向表面に浸透します。

浸潤していない周囲の組織よりも暗く見える浸潤領域を防水ペンでマークします。