共焦点顕微鏡を用いた農業浸透植物葉の体質性腫を可視化するためのアニリンブルー染色

まず、目的のベクターを持つアグロバクテリウム・ツメファシエン細胞が浸潤したNicotiana benthamianaの葉を入手します。plasmodesmataの視覚化のために、顕微鏡のスライドに1%アニリンブルーの200マイクロリットルのアリコートを追加します。次に、ブレードを使用して、浸潤した葉の領域を静脈から離し、アバキシシャル面を上にしてスライド上のアニリンブルー溶液に移します。

カバーガラスで覆う前に、葉の組織サンプルが完全に沈んでいることを確認してください。サンプルを入れたスライドを真空ポンプに取り付けられたデシケーターに入れます。0.8パスカル未満で2分間避難します。

その後、ゆっくりと圧力を離し、スライドを暗所で室温で30分間インキュベートします。次に、アニリンブルーの蛍光シグナルをレーザー走査型共焦点顕微鏡で視覚化します。