まず、スポイトを使用して、ショ糖を含まないMurashige and Skoog Basal Media寒天プレートに濾紙を置き、1.2%の植物寒天を補充した濾紙に、条件の各グループに対して250シロイヌナズナの種子をプレート化します。プレートをアルミホイルで包んで光を遮断し、摂氏4度のインキュベーターに2日間置いて春化を誘発します。2日後、ホイルを開封し、春化した種子を成長チャンバーに移します。
植物が5日間成長するのを待ちます。次に、生後5日の苗が入ったプレートを防水粘着テープで密封します。プレートを摂氏40度の水浴に1時間置き、熱ストレス治療を行います。
熱処理後すぐにプレートを冷却し、22°Cに設定された成長チャンバーに2時間移して回復させます。250本の熱処理された苗木または未処理の苗木を1.5ミリリットルの微量遠心チューブに収穫します。採取したサンプルは、直ちに液体窒素で凍結します。
12.5%24.4%36.3%48.1%および60%の濃度でショ糖勾配溶液を準備します不連続なショ糖密度勾配を調製するには、最初にチューブの底に2.2ミリリットルの60%ショ糖溶液をロードします。次に、チューブを摂氏80度の冷凍庫に入れて、ショ糖溶液を固体状態に凍結します。固化後、直列の他のスクロース濃度のそれぞれについて2.2ミリリットルを下から上にロードします。
準備したスクロース勾配は、使用するまで摂氏80度で保管します。
