国立衛生研究所からの助成金（R01 NS37253とN01 NS055167）と全国多発性硬化症協会（RG 3288-A6）によって部分的にサポートされています。

1。 CFA乳化抗原を準備する<ol><li> 2 mg / mLの濃度でリン酸緩衝液（PBS）でモルモットMBP（Swanborg1の方法に従って調製し、4℃で凍結乾燥された形式で格納°C）を溶解する。合成されたMBPペプチド（MBP 60から80、SHHAARTTHYGSLPQKSQR 2）が使用されている場合は 、2 mg / mLの溶液を調製。ルアーロック付きガラスシリンジに抗原溶液（マウス1匹あたり0.1mlを免疫するために）適切な量を描画します。 </li><li>ルアーロックを備えた別のガラスシリンジに抗原溶液に等しい完全フロイントアジュバントH37Ra（0.1重量％）（CFA、ディフコ）の音量を上げて描画します。 </li><li>三方活栓を持つ2つのガラスシリンジを接続します。前後にプランジャーを押すことにより、CFAのMBPソリューションを混在させること。エマルジョンが形成されるまで運動を続ける。 </li><li>エマルジョンが形成されるかどうかをテストするには、1つの注射器に混合物のすべてを押してください。空のシリンジを外し、tを引く彼が戻って少しプランジャと、室温で清潔な水のビーカーに残留エマルションの液滴を除去してください。エマルジョン滴の水の表面にそのまま残っている場合は、エマルジョンが形成される。エマルジョン滴分散する場合は、シリンジを接続し直して、混合の動きを続けています。 </li><li>抗原の正確な用量の配信を保証するために予防接種プロセスのために1 mLのプラスチック製の注射器を使用しています。プラスチックシリンジに抗原エマルジョンを転送するには、プランジャーを引き出して、前のガラスシリンジは1.4のように切断された三方活栓の開口部に、空のプラスチック製の注射器を挿入します。 </li><li>ガラスシリンジのプランジャーを押すことにより、リムにプラスチックシリンジを記入してください。背面のプラスチックシリンジのプランジャーを挿入し、プラスチックシリンジで1.2 mlのマークに到達するまで戻って過剰なエマルジョンを押してください。この操作は気泡をプラスチックシリンジ内に閉じ込められていないことを保証します。 </li><li>三方活栓からプラスチック製シリンジを取り外します。アッタ＃26ゲージの針CHプラスチックシリンジへ。エマルジョンは今針の空隙容積を埋めるように、1 mLの標線までプランジャーを押してください。 </li></ol> 2。ドナーマウスの予防接種注：雌C57BL / 6マウスは、通常、当初は国立衛生研究所のMcFarlinのグループ3で設計された方法に従って、側面の4つのサイト内の抗原エマルジ ​​ョンを注入されています。経験豊かな研究者のために、一人は、全体のタスクを実行することができます。初心者のための、ヘルプが一人は、マウスを保持し、他の人が注射を行うよう要請することができます。また、マウスは注射用の麻酔をすることができます。 <ol><li>首の皮でしっかりとマウスを保持し、胸部と腹部が容易にアクセス可能であることを、例えば4 番目と5 番目の指の間に尾を抑える。 </li><li> （MOの少し右の脇の下上胸部のサイトで1mLのプラスチック注射器の針を置く使用）と抗原エマルジョン0.05 mLを皮下に注入します。白っぽいCFAの小さな膨らみが薄い皮膚を通して見ることができます。わずかに左脇の下上胸部のサイトに対しても同じことを繰り返します。 </li><li>尾を解放し、右足（マウスの）を手に取り、それを回すと4 番目と5 番目の指の間それを保持します。右脇腹のちょうど肋骨の場合、以下のサイトを見つけて、抗原エマルジョンを0.05 mLを注入します。 </li><li> 、右足を離してマウスを他の方法にして、4 番目と5 番目の指の間に左足を（マウスの）を押し続けます。左脇腹のちょうど肋骨の場合、以下のサイトを見つけて、抗原エマルジョンを0.05 mLを注入します。 </li><li> 10匹のマウスの注射後に新鮮な針に変更するか、針が鈍くなった場合。 </li></ol> 3。 7〜10日予防接種後の組織培養のためのリンパ節細胞の分離<ol><li> 7〜10日間の免疫後、マウスを犠牲にと所属リンパ節を削除します。安楽死の好ましい方法は、CO 2吸入によるものである。犠牲にした後、ピンと伸ばして、ボードに固定された手足の解剖ボードに背の上にマウスを置く。マウスは70％エタノールのスプレーで湿らされています。 </li><li>まで滅菌ハサミとピンセットで顎に腹部の下端から中央に長手方向に皮膚にスリットをカットします。 </li><li>各脚の下に鼠径部の領域から腹部の皮膚を切り取ります。戻って皮をむき、鼠径部リンパ節を公開し、皮膚を突き止める。 </li><li>皮膚が剥がれると脇の下の近くに腋窩リンパ節を公開するために釘付けにすることができるように前肢（左と右）に沿って皮膚を切り取ります。 </li><li>一緒に仕事を鉗子の2ペアで、カバーすると鼠径部リンパ節周囲結合組織を引き離します。結合組織がクリアされると、リンパ節の下に鉗子のペアを1つ配置し、本体から引き離します。配置滅菌PBSを充填した35ミリメートルのペトリ皿のリンパ節。 </li><li>鉗子の2ペアを使用して、2つの腋窩リンパ節を覆う結合組織を引き離します。リンパ節を分離し、ペトリ皿に置きます。出血が非常に困難なリンパ節を識別できますように領域を横断する血管を壊さないように十分注意してください。 </li><li>すべてのリンパ節が収集された後、バイオセーフティフードにペトリ皿を移動します。他のに対して1を粉砕し、鉗子の2ペアでリンパ節を分割し、いじめる。また、リンパ節は、ペトリ皿の底のリンパ節を押圧する3 mLのプラスチックシリンジのプランジャの平らな端を使用して分割することができます。 </li><li>膜や破片を除去するためにナイロンメッシュを介してからかったリンパ節細胞懸濁液を渡します。 </li><li>滅菌したPBSを使用して50mLにリンパ節細胞懸濁液を作る。 10分間1000rpmで遠心します。培養液中にペレットを再懸濁します。実行可​​能なCを行うエルは4×10 6細胞/ mLの濃度をカウントし、調整します。 UseRPMI 1640 10％ウシ胎児血清、2mM L-グルタミン、1mM MEMピルビン酸ナトリウム、0.1 mMのMEM非必須アミノ酸、100 U / mlペニシリン、100μg/ mlのストレプトマイシン、10mMのHepes緩衝液、5×を添加した10 -5 M 2-ME。細胞を再懸濁する前に、事前に暖かい文化。 </li><li>ウェルあたり2mLのボリュームで24ウェル培養プレート（最終細胞濃度8×10 6細胞/ウェル）で細胞を培養。は100μg/ mLの最終濃度で各ウェルに抗原を追加します。 5％CO 2で37℃のインキュベーター内で培養プレートを配置します。 5日間細胞をインキュベートします。 </li></ol> 4。 5日培養開始後、培養したリンパ節細胞を採取する<ol><li>パスツールピペット、ガラスまたは少量をピペットでピペッティングすることにより、各ウェル中に細胞を混ぜます。 50 mLの遠心チューブに細胞を回収。 </li><li> 10分間1000rpmで遠心します。 ResusPBSの小さなボリュームに細胞ペレットを保留する。 </li><li>細胞をカウントし、滅菌PBSで2.5×10 8細胞/ mLに生存細胞濃度を調整します。 ＃26ゲージの針を備えたシリンジにセルを描画します。 </li><li>尾静脈を拡張するためのレシピエントマウスのケージの上にヒートランプを配置します。 </li><li>マウスホルダーを使用して、ホルダーのスリットを介してマウスの尾を拡張します。尻尾を拡張するために引き出します。静脈の位置を確認します。 </li><li> 5×10 7細胞に等しい、細胞懸濁液0.2 mLの/マウスを注入します。 </li></ol> 5。レシピエントマウスの抗原チャレンジ20日後に細胞の移動と病気の症状の開発<ol><li>抗原と病気の兆しを見せていないレシピエントマウスに挑戦しています。手順は、 &quot;ドナーマウスの免疫化&quot;のセクション2と同じです。 </li><li> 7〜10日、抗原チャレンジ後の麻痺性疾患の発症を観察します。 <ol><li>この病気は尾の弱点で始まります。病気は1として評価されている尾は弛緩になったとき。この疾患は、マウスが1つの後肢に麻痺している2として評価されている。両後肢が麻痺し、前方のクロール時にマウスが両方の後肢をドラッグしているとき病気は3等級されています。マウスマウスが全く動かないまま、両方の前肢の使用を失ったときに病気が4等級されています。マウスが瀕死であると体が丸くなったときに病気が5等級されています。死は、悪性度疾患6 4として採点しています。 </li></ol></li><li>このプロトコルは以下のC57BL / 6マウスに誘導されるMBP特異的EAEは相性です。マウスは、病気から回復するかもしれませんが、自発的再発を起こさない。 </li></ol> 6。代表的な結果下塗りとin vitroで展開されたドナーのリンパ節細胞に投与したマウスは、疾患の誘導への抵抗を反映して、EAEの疾患の症状を開発していませんでした。しかし、重篤な疾患は抗原チャレンジの能力を実証し、抗原チャレンジ（ 表I）の後に開発耐性機構を逆転させるインチ抗原チャレンジの2つの特殊な機能は、抗原の投与量と病気を誘発することが課題の動態についても説明します。 表IIIに示すように、抗原の非常に低用量が必要となります。抗原（ 表IV）でチャレンジしたときに驚くべきことに、前年ドナー細胞を投与したマウスは依然として深刻な疾患を発症する可能性があります。これら二つの観測が強くEAE抵抗を維持するために &quot;長命の&quot; T細胞の関与を示唆している。このプロトコルは、多くのEAE耐性マウス系統4に適用されます。 <img alt="図1。" src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> 有名な耐性のマウス系統におけるEAEの誘導のための実験デザインの図1のフローチャート。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> 臨床EAE 移入後の </td><td colspan="3"><stroNG&gt;臨床EAE 抗原チャレンジ後</td></tr><tr><td> 歪み </td><td> 抗原 </td><td> 発生率 </td><td> AV。病気のグレード （範囲） </td><td> AV。発症日 （範囲） </td><td> 発生率 </td><td> AV。病気のグレード （範囲） </td><td> AV。発症日 （範囲） </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21分の21 </td><td> 4.0（3-5） </td><td> 8.0（6-10） </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7月7日</td><td> 3.85（3-5） </td><td> 9.28（9-10） </td></tr><tr><td> BALB / c系</td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5月5日</td><td> 3.2（3-4） </td><td> 7.0（7） </td></tr><tr><td>のC3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4月4日</td><td> 3.2（3-4） </td><td> 8.0（8） </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60から80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4月4日</td><td> 2.75（2-4） </td><td> 10.2（9-11） </td></tr></tbody></table> 表I。C57BL / 6マウスではMBP-媒介EAEの誘導。下塗りとin vitroで展開されたドナー細胞はC57BL / 6マウスではEAEを誘導しなかったでの養子免疫伝達。抗原チャレンジ後のセルの転送は、疾患の誘導に影響を受けやすいマウスをレンダリングされます。 AV、平均。 ND、行われません。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> 抗原チャレンジ後の臨床EAE </td></tr><tr><td> プライミング抗原 </td><td> チャレンジ抗原 </td><td> 発生率 </td><td> AV。病気のグレード （範囲）</td><td> AV。発症日 （範囲） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA単独で</td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA-CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3月3日</td><td> 4.0（4.0） </td><td> 7.7（7-9） </td></tr></tbody></table>抗原チャレンジの表II。特異性。レシピエントマウスは、プライミング抗原だけでなく、他の無関係の抗原とチャレンジした。のみプライミング抗原は、重篤な疾患を誘発した。 OVA：ニワトリ卵白アルブミン。 AV、平均。 <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> 抗原チャレンジ後の臨床EAE </td></tr><tr><td> チャレンジ抗原用量（μg/マウス） </td><td> 発生率 </td><td> AV。病気のグレード （範囲） </td><td> AV。発症日 （範囲） </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4月4日</td><td> 3.75（3-4） </td><td> 8.25（7-9） </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4月4日</td><td> 3.67（3-4） </td><td> 7.5（7-8） </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4月4日</td><td> 3.25（3-4） </td><td> 8.25（7-10） </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4月4日</td><td> 3.0（3.0） </td><td> 8.25（8-9） </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4月4日</td><td> 3.0（3.0） </td><td> 8.76（8-9） </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4月4日</td><td> 2.5（2-3） </td><td> 9.75（9-10） </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2月4日</td><td> 1.0（1.0） </td><td&gt; 16（14-18） </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> 表III。チャレンジ抗原の用量は、疾患の誘導に必要です。レシピエントマウスに挑戦するために使用されるMBPの種々の濃度を試験した。 AV、平均。 <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> 抗原チャレンジ後の臨床EAE </td></tr><tr><td> チャレンジ抗原 </td><td> チャレンジの日 </td><td> 発生率 </td><td> AV。病気のグレード （範囲） </td><td> AV。発症日 （範囲） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3月4日</td><td> 1.33（1-2） </td><td> 9.67（9-10） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </TD&gt; <td> 4月4日</td><td> 3.0（3.0） </td><td> 8.25（7-9） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4月4日</td><td> 3.75（3-4） </td><td> 7.25（7-8） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4月4日</td><td> 4.0（4.0） </td><td> 8.0（7-9） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4月4日</td><td> 3.5（3-4） </td><td> 7.5（7-8） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4月4日</td><td> 3.75（3-4） </td><td> 9.0（8-10） </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3月3日</td><td> 3.0（3.0） </td><td> 10.33（10-11） </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3月3日</td><td> 3.0（3.0） </td><td> 7.0（7.0） </td></tr></tbody></table> 表IV。抗原チャレンジの動力学。レシピエントマウスを採用する様々な時点ポストにチャレンジしたIVEセル転送。 AV、平均。

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	<li>Swanborg, R. H., Sabato, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis.">Experimental allergic encephalomyelitis.</a> Methods in Enzymology. 162, 413-421 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice:+Mapping+of+T+cell+epitopes+and+T+cell+Vb+gene+segment+usage.">Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage.</a> J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).</li><li>McCarron, R., McFarlin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptively+transferred+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+SJL/J,+PL/J,+and+(SJL/J+x+PL/J)F1+mice.+Influence+of+I-A+haplotypes+on+encephalitogenic+epitope+of+myelin+basic+protein.">Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein.</a> J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).</li><li>Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -. L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge+induces+consistent+murine+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice+and+other+reputed+resistant+strains.">A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains.</a> J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).</li><li>Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-specific+T+cells+also+recognize+neuronal+autoantigen+in+a+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Nat. Med. 15, 626-632 (2009).</li><li>Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-10+plays+an+important+role+in+the+homeostatic+regulation+of+the+autoreactive+reperteroire+in+na&#239;ve+mice.">IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in na&#239;ve mice.</a> J. Immunol. 173, 828-834 (2004).</li><li>Anderton, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treg+and+T-effector+cells+in+autoimmune+CNS+inflammation:+a+delicate+balance+easily+disturbed.">Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed.</a> Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).</li><li>Arnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+allergic+encephalomyelitis+-+susceptibility+and+suppression.">Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression.</a> Immunol. Rev. 55, 5 (1981).</li><li>Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+mice+by+antibodies+against+IFN-g.">Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g.</a> J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).</li><li>Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+encephalomyelitis-resistant+mice+have+highly+encephalitogenic+myelin+basic+protein+(MBP)-specific+T+cell+clones+that+recognize+a+MBP+peptide+with+high+affinity+for+MHC+class+II.">Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II.</a> J. Immunol. 154, 388-398 (1995).</li><li>Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin+proteolipid+protein-specific+CD4+CD25++regulatory+cells+mediate+genetic+resistance+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).</li><li>Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myelin-+specific+regulatory+T+cells+accumulate+in+the+CNS+but+fail+to+control+autoimmune+inflammation.">Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation.</a> Nature Med. 13, 423-431 (2007).</li><li>Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y., Broglie, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+myelin+basic+protein-specific+adoptive+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL/6+mice.+Longevity+of+donor+T+cells+and+lack+of+disease+relapses.">Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses.</a> Neuroimmunology Research Focus. , 175-191 (2007).</li></ol>

ない財務情報開示。

マウスではEAEの研究は、しばしばneuroantigens、ミエリン塩基性タンパク質（MBP）、プロテオリピドタンパク質（PLP）またはミエリンオリゴデンドロサイトタンパク質（MOG）を利用しています。以前の研究では、主にMBPを使用していました。 PLPは、SJLマウスから強い、一貫した応答を刺激する。最近では、MOGはB6マウスではこの抗原と疾患の誘導の影響を受けやすいので、使用される一般的な神...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>モルモット脊髄</td><td>ロックランド免疫化学薬品株式会社 ギルバーツヴィル、ペンシルバニア州19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td>凍結</td></tr><tr><td>フロイントアジュバント、完全H37Ra </td><td>ディフコ デトロイト、ミシガン</td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> MULTIFIT交換可能なシリンジ</td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com /問い合わせ</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td>メディアテック（株） マナッサス、バージニア州 <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10から040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich社 <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td>マウス</td><td>ジャクソン研究所 バーハーバー、メイン州</td><td> B6マウス：0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

overcoming unresponsiveness in experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) resistant mouse strains by adoptive transfer and antigenic challenge

実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）は中枢神経系（CNS）の炎症性疾患であり、ヒト脱髄性疾患、多発性硬化症（MS）の研究のための動物モデルとして使用されています。 EAEは中枢神経系への単核細胞の病理学的浸潤と麻痺性疾患の臨床症状によって特徴付けられる。他の耐性がありながら、MSと同様に、EAEは、その特定のマウス系統の遺伝的制御下にもあり、疾患の誘導に影響を受けています。通常、ミエリン塩基性タンパク質（MBP）と免疫C57BL / 6（H-2 b）のマウスは、麻痺の兆候を開発するために失敗します。この無反応は、実験的なプロトコルがここで説明したように、確かに抗原処理やMBPの抗原提示の欠陥によるものではないC57BL / 6マウスと同様に他の有名な耐性マウス系統に深刻なEAEを誘導するために使用されていた。さらに、MBPに対する反応性C57BL / 6およびBALB / cマウスから脳炎誘発性T細胞クローンは成功していた完全に分離し、伝播されます。 実験プロトコルは、（200μg/マウス）MBP-プライミングC57BL / 6ドナーリンパ節細胞が単離され、MBP特異的T細胞のプールを拡大する抗原で5日間培養した細胞の養子免疫伝達システムを使用して含まれます。培養期間の終了時に50万人の生細胞を尾静脈を通してナイーブ同系の受信者に転送されます。ので、通常処理されたレシピエントマウスは、このように、その耐性状況を再確認し、EAEを発症しない、彼らはいつまでも通常のままでかまいません。十日後にセル転送、レシピエントマウスは、完全フロイントアジュバント（CFA）乳化側面の4つのサイトではMBPでチャレンジされています。厳しいEAEは10〜14日チャレンジ後、これらのマウスでの開発を開始します。結果は、疾患の誘導は無関係の抗原が疾患の臨床徴候を誘発しなかったとの課題として、特定の抗原であることを示した。重要なのは、抗原の投与量の滴定に使用される挑戦レシピエントマウスは、5μg/マウスのように低くなることを示した。さらに、抗原チャレンジのタイミングの運動研究では、病気を誘発するその挑戦は、5日後に抗原チャレンジと445日後に抗原チャレンジを介している限り、早ければ効果的であることが判明した。これらのデータは強く無反応を維持するために &quot;長寿命の&quot; T細胞集団の関与に向かって指しています。このシステムでは制御性T細胞（Tregの）の関与が定義されていません。

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Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

特定のマウス系統では、ミエリン塩基性タンパク質で実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）の誘導に抵抗することができます。ここで説明するには、無反応を逆にし、いくつかの典型的なEAE耐性マウスの汚れに麻痺性疾患を引き起こす単純な予防接種プロトコルです。

移入、抗原チャレンジにより実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）抵抗性マウス系統の応答がないことを克服する

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

overcoming-unresponsiveness-experimental-autoimmune-encephalomyelitis

Research

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Immunology and Infection

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

20.2K ビュー.  St. John-Providence Health System. 特定のマウス系統では、ミエリン塩基性タンパク質で実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）の誘導に抵抗することができます。ここで説明するには、無反応を逆にし、いくつかの典型的なEAE耐性マウスの汚れに麻痺性疾患を引き起こす単純な予防接種プロトコルです。

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Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

実験的転移とCTLの養子移入免疫療法のマウスモデル

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

免疫・感染学

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of human Type 1 diabetes (T1D). Cell transfer studies in irradiated recipient mice have established that T cells are pivotal in T1D pathogenesis in this model. We describe herein a simple method to rapidly induce T1D by adoptive transfer of purified, primary CD4+ T cells from pre-diabetic NOD mice transgenic for the islet-specific T cell receptor (TCR) BDC2.5 into NOD.SCID recipient mice. The major advantages of this technique are that isolation and adoptive transfer of diabetogenic T cells can be completed within the same day, irradiation of the recipients is not required, and a high incidence of T1D is elicited within 2 weeks after T cell transfer. Thus, studies of pathogenesis and therapeutic interventions in T1D can proceed at a faster rate than with methods that rely on heterogenous T cell populations or clones derived from diabetic NOD mice.

We provide a reproducible method to induce type 1 diabetes (T1D) in mice within two weeks by the adoptive transfer of islet antigen-specific, primary CD4+ T cells.

糖尿病CD4の養子移入+ T細胞によるマウスの加速された1型糖尿病の誘導

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While the exact etiology of the disease is yet unclear, autoreactive T lymphocytes are thought to play a central role in its pathophysiology. MS therapy is only partially effective so far and research efforts continue to expand our knowledge on the pathophysiology of the disease and to develop novel treatment strategies. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model for MS sharing many clinical and pathophysiological features. There is a broad diversity of EAE models which reflect different clinical, immunological and histological aspects of human MS. Actively-induced EAE in mice is the easiest inducible model with robust and replicable results. It is especially suited for investigating the effects of drugs or of particular genes by using transgenic mice challenged by autoimmune neuroinflammation. Therefore, mice are immunized with CNS homogenates or peptides of myelin proteins. Due to the low immunogenic potential of these peptides, strong adjuvants are used. EAE susceptibility and phenotype depends on the chosen antigen and rodent strain. C57BL/6 mice are the commonly used strain for transgenic mouse construction and respond among others to myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG). The immunogenic epitope MOG35-55 is suspended in complete Freund's adjuvant (CFA) prior to immunization and pertussis toxin is applied on the day of immunization and two days later. Mice develop a "classic" self-limited monophasic EAE with ascending flaccid paralysis within 9-14 days after immunization. Mice are evaluated daily using a clinical scoring system for 25-50 days. Special considerations for care taking of animals with EAE as well as potential applications and limitations of this model are discussed.

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an established animal model of multiple sclerosis. C57BL/6 mice are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG35-55), resulting in an ascending flaccid paralysis caused by autoreactive immune cells in the central nervous system. Protocols for disease induction and monitoring will be discussed.

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

エフェクターCD4の養子移入によるマウス腸の炎症の誘導<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt;高い</sup&gt;免疫不全マウスへのT細胞

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

実験的自己免疫性脳脊髄炎研究のためのシンプルで効率的な生産とマウスミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質の精製

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

生体内で実験的自己免疫性脳脊髄炎時単位の内皮細胞およびグリアの障壁の障害の可視化

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

グルコース-6-リン酸イソメラーゼ(G6PI)誘発RAマウスにおけるiNKT細胞の導入免疫療法

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系におけるリンパ球浸潤のフロー細胞量分析

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

移入、抗原チャレンジにより実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）抵抗性マウス系統の応答がないことを克服する

PLAYLIST