このプロジェクトの彼らのハードワークのためのダイアナIcaza氏-Culaki、クリスタルサンプソンとTheologia Karagiorgisに感謝します。

これらの実験プロトコルは、すべての被験者と手順は、ナショナルケアのための健康ガイドの研究所や実験動物の使用に適合していることを証明制度動物実験委員会によって承認されています。 1.被験者<ol><li>購入および/または血統の雄Sprague-Dawleyラット（260〜300グラム）。 </li><li>金網ケージで個別ハウスラット。ラット飼料と水を自由に摂取させて12時12時間の明/暗サイクルでそれらを維持します。 </li><li>適切なサンプルサイズを割り当てます（例えば n≈6から8）ランダムにグループに。 </li></ol> 2.試験装置とインテーク手順<ol><li>ゴム栓で較正遠心管を使用して、45°の角度金属シッパーチューブを提示溶液（0.1 mlの±）正確な測定を提供します。キャリブレーションの可視性を可能にするために、ピンと張った金属バネによりホームケージに固定します。 </li><li> 〜（食糧配給を制限溶液を消費する意欲を高めるために、元の体重の85％までの重量を低減するために、ラットの15 / G /日）。注： - 5日体重減少は3間取る必要があります。 </li><li>ラットは（1分未満）短い待ち時間で、その後のテストソリューションをサンプリングする確率を最大化するために、1時間のセッションで4日間0.2％サッカリンの事前トレーニングソリューション（10ミリリットル）を提供します。 </li><li>数滴をこぼしことにより、遠心管を通る流れを確認してください。 </li><li>摂取量測定値を得るために、各セッションの前と後の管を秤量します。 </li><li> A）水、b）の小説風味（0.05％チェリーフレーバー）0.2％サッカリン、c）は8％のフルクトース、D）8：6ソリューション（10ミリリットル、1時間）のいずれかを受けたサブグループに5日目吸気テストを実行します％グルコース、E）0.3％キサンタンガム中に懸濁し、3.5％のコーン油、およびf）0.3％キサンタンガム。 </li><li>栄養溶液は等カロリーであることを確認します。このように、3.5％コーン油の濃度が8％糖液に等カロリーのです。 </li><li>目を確認してください短い待ち時間（1分未満）を有するラットの試料溶液に。この要件が満たされない場合、その後の研究から被写体を捨てます。 </li></ol> 3.組織標本<ol><li>各試験溶液への最初の曝露後にペントバルビタール90分の腹腔内注射によって各動物を麻酔。動物が適切に深い耳介刺激に揺れ直接角膜の圧力や頭以下の点滅、動物はもはや足のピンチに撤退などの反射神経に応答することを実証しないことにより、麻酔されていることを確認。 </li><li>以前69記載されているように経各動物を灌流。 <ol><li>ペントバルビタールナトリウム（65 mgの/ kg）を過剰投与によりラットを麻酔、胸郭を削除し、心臓69への自由なアクセスのための胸を露出させます。 </li><li>左の心臓弁の頂点に針を置き、大静脈を切りました。リン酸緩衝固定コ続いてリン酸緩衝液（PBS、~180 ml）を投与します4％パラホルムアルデヒド（~180 ml）をntaining。 </li><li>動物が実際に液体は、鼻、口、および生殖器領域などの他の空洞を残しているかどうかを調べることによって正確に灌流されていることを確認してください。注：パラホルムアルデヒドで適切な固定は、大きな筋肉の動きを伴うことになります。これが発生しない場合には、この反応が起こるまで、針を再調整します。 </li></ol></li><li>すぐに離れて頭蓋骨から毛や皮膚を切断して頭蓋骨から脳を削除してください。後方から前方に移動する脳から骨をクラックし、除去するために、骨鉗子を使用してください。骨鉗子、骨や髄膜軟膜の間にあることを確認して、小脳以下と背後の領域で最初に動作します。頭蓋骨の上部と側面が削除されると、ベースから脳を持ち上げるために、小さなへらを使用し、小さなハサミで脳神経を切り取ります。骨を削除しようとしたときに、脳に損傷を与えないように注意してください。 </li><li> 4℃で一晩4％パラホルムアルデヒド溶液中で脳を修正しました。彼らは容器の底に沈降するまで、室温で30％スクロース/ 70％PBS溶液中で脳を置きます。 </li><li>脳をブロック<ol><li>嗅球に対して横方向に尾を切断、脳の吻側部分を削除してください。 </li><li>小脳や橋のレベルで横方向に切断し、脳の尾の部分を削除してください。 </li></ol></li><li> + - （ブレグマに2.20ミリメートル吻側2.86）、NACのコアとシェルと背側線条体（スライディングミクロトームのステージに固定された尾部を冠状脳をマウントし、のmPFCを通じて冠状切片（40μm）をカット1.76 - ブレグマに1.60ミリメートル吻側）、AMY（-2.12 - ブレグマ-2.92ミリメートルの尾）、およびVTA（-5.20 - ブレグマ-5.60ミリメートルの尾）。指導のためのラット脳アトラス70を使用してください。 </li><li>最終的な免疫組織化学的分析71のためにPBSで満たされた24ウェルプレートの個々のウェルに自由に浮遊セクションを収集します。 24私たちをシールするためにパラフィルムを使用して、LLプレートをPBSは、容器内に蒸発し、脳を乾燥しないことを確認します。 4℃で脳組織を保管してください。 </li></ol> （71から適応）4のc-fosの手順<ol><li> 5％正常ヤギ血清の5ミリリットルと0.2％トリトンX-100をPBS中で1時間で各セクションを扱います。 </li><li> 1mlのPBSを含むウェルで36時間4℃で：一次抗体で処理した切片（5,000ウサギ抗c-FOS、1）インキュベート。 </li><li>リンスのセクションでは、10分間、PBS（5ml）で3倍。 </li><li>二次抗体とインキュベートする（ビオチン化ヤギ抗ウサギ; 1：200）を室温で2時間、1mlのPBSを含むウェルに。 </li><li> 10分ごとに、PBS中の各セクションの3倍（5ミリリットル）をすすぎます。 </li><li> 5mlのPBSでAvadin DH（100μL）およびビオチン化西洋ワサビペルオキシダーゼH（100μlの）で構成キットに付属市販のアビジン - 西洋ワサビペルオキシダーゼ混合物中で2時間すすぎセクションをインキュベートします。 </li><li>再すすぎのセクションでは、PBで3倍10分間、S（5ml）中。 </li><li> DAB溶液5mlを含有するウェル中の組織の反応性に応じて、10分- 5用0.0015％のH 2 O 2の存在下で、0.05％ジアミノベンジジン（DAB）を用いて切片を反応させます。 </li><li>ダブルラベルVTAセクション。 4℃で一晩、PBS（5ml）溶液：チロシンヒドロキシラーゼ（TH）抗体（2,000ウサギ抗ラットTH、1）でそれらをインキュベートします。 </li><li>リンス切片は10分間ごとに、PBS（5ml）に3倍。 </li><li>二次抗体とインキュベートする（ビオチン化ヤギ抗ウサギ; 1：200）、PBS（5ml）中に室温で2時間。 </li><li>リンス切片は10分間ごとに、PBS（5ml）に3倍。 </li><li>二次抗体 - ペルオキシダーゼ複合体を用いて、抗体を可視化します。 DAB /のNiCl溶液5mlを含有するウェル中の組織の反応に応じて、10分 - 5ため、0.05％DABおよび0.3％硫酸ニッケル溶液の組み合わせと反応します。 </li><li> DAB溶液は、それから色が乳白色薄緑色であることを確認してください0.3％の硫酸ニッケルとの反応。解決策があまりにも緑である場合、反応は暗すぎるとなります。 </li><li>ゼラチン被覆スライド上のすべてのセクションをマウントします。トルエン系溶液（TBS）の数滴でスリップをカバーし、それらを一晩乾燥してみましょう、と。 </li><li>実験条件は、観察者に知られていないようにコードがスライドします。 </li></ol> c-fosの免疫反応性カウントの5決意<ol><li>縁前方ののmPFC、infralimbicのmPFC、NACコア、NACシェル、側底AMY核、中央皮質内側AMY、背側線条体、およびVTA：これらの関心領域（ROI）内のFos陽性ニューロンをカウントするために公平な観察者のペアを割り当てます。 c-Fosの免疫反応性は、TH +とVTAにおけるTH-細胞に存在したかどうか。 図1は、顕微鏡からNACのスクリーンキャプチャした画像を提供して区切ります。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/53897/53897fig1.jpg" /> <stroNG&gt;のc-fosのカウントが行われていることにより、グリッドによって概説関心領域の表示図側坐核（NAC）の1.代表セクション。NACシェルはNACのコアに内側と腹側に発見されました。 NACのコアは、前交連取り囲む（前方コムを。）。側脳室（横ベント。）の腹側範囲が表示されている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53897/53897fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <ol start="2"><li>試験条件のすべてにすべての動物に共通するサイトごとに少なくとも3つの代表的なスライスを分析します。 </li><li>アウトライン（ 図1）をトレースすることで、各ROIのための領域全体を分析するためのソフトウェアおよび光学顕微鏡を使用してください。 <ol><li>指定されたサイトでは、アプリケーションを開き、買収ドロップダウンメニューをクリックし、「ライブ映像」をクリックします。焦点にROIを持参し、基準点を確立するために、画面をクリックします。そして、TRガイドとしてグリッドを使用して、選択された脳領域をエース。トレースが完了した後、細胞を（ - 5.3.1.3 5.3.1.1ステップ）数えます。 <ol><li>ソフトウェアのアイコンをダブルクリックします。 「取得」し、「ライブ映像」をクリックして、メニューバーに移動します。焦点にROIを持参し、基準点を確立するために、画面をクリックします。 </li><li>グリッドツールバーに移動し、「表示グリッド &quot;と&quot;使用グリッドラベル」をクリックします。所定のトレースとROIの概要を説明します。 </li><li> c-fosの細胞の数を維持するために左側のサイドバーにある「+」を選択し、各ROIエリア内のすべてのセルを数えます。カウントを登録するために単独で各セルをクリックします。定義された暗赤色の円は（ 図1）が観察されたときのc-fosのための陽性細胞を考えてみましょう。 </li></ol></li><li>サイトごとにこの手順を繰り返します。 </li><li>レコードは、実験ノートにし、将来の分析のためにコンピュータ上でカウントされます。トレースとカウントを保存するには、「セーブデータファイル」「ファイル」をクリックして、メニューバーに移動します。 </li></オール&gt; </li><li>各ROI内の各セクションのための2つの無知な評価者の（カウントの相関関係を使用して）評価者間信頼性が常に0.8を超えていることを確認してください。 </li></ol> 6.統計<ol><li> 1日目、2、3、4 69のサッカリン摂取量を比較した分散の反復測定1ウェイ分析（ANOVA）を使用して、最初の4日間にわたり、ベースラインサッカリンの摂取量を評価します。 </li><li>ランダム化されたブロック2ウェイANOVA 69を使用して、6つのグループのテスト摂取量（5日目）とサッカリン摂取量（4日目）を比較。 </li><li>個々の有意な効果69を決定するために、テューキー比較した（p &lt;0.05）を使用します。 </li><li>評価者間信頼性を決定し、一般的な観察者のカウントを使用しています。 </li><li>各サイト69のための3つの代表スライスの平均のc-fosのカウント。 <ol><li> 6ソリューション（3.5％コーン油、8％グルコース、8％のフルクトース、0.2％風味のサッカリン、XAの摂取により誘導されるのc-fosの活性化の1方向ANOVAを実行しますperilimbicのmPFC 69用nthanガム制御および水）。 </li><li> infralimbicのmPFCのための6つのグループの繰り返し平行分析、NACコア、NACシェル、基底外側AMY、中央皮質内側AMY、VTAと背側線条体。個々の有意な効果69を明らかにするためにテューキー比較した（p &lt;0.05）を使用します。 </li></ol></li><li>その懸濁剤の水の摂取量と摂取の両方でコーン油の摂取量を比較し、キサンタンガム。非栄養甘味料、サッカリンの水の摂取量と摂取量の両方と果糖とブドウ糖摂取量を比較してください。 </li><li>各サイト内の溶液の摂取量およびc-fosの活性化との間に有意な関係はボンフェローニrの相関（P &lt;0.05）を用いて観察したかどうかを確立します。 <ol><li>体系的に3.5％コーン油グループの各動物についてperilimbicとinfralimbic前前頭皮質におけるc-fosの数を比較します。 </li><li> 6サイトの各ペアの系統的に平行分析を繰り返して（VTA、背側線条体、infralim3.5％のコーン油のためのBICのmPFC、perilimbicのmPFC、NACコア、NACシェル、基底外側AMY、中央皮質内側AMY）。 </li><li>他の5つの実験吸気条件（8％グルコース、8％のフルクトース、0.2％風味のサッカリン、キサンタンガム制御および水）のために、これらの6サイトの体系平行分析を繰り返します。 </li></ol></li><li>溶液条件内の同じ動物をボンフェローニrの相関（P &lt;0.05）を使用して、ソリューション全体でのc-fosの活性化の間、各ソリューション内の重要な関係を決定することによって、すべてのサイトで評価されたという事実を利用します。 </li></ol>

著者には、競合する金融利害関係を持っていません。

研究の目的は、DAの報酬関連のニューロンのソース（VTA）と前脳投影ターゲット（NAC、AMY、のmPFC）は同時に携帯のc-fosの技術を用いて、ラットの脂肪と砂糖の新規摂取後に活性化されたかどうかを判断することでした。本研究は、これまで69発表された研究のプロトコルの詳細な説明です。これは、VTAは、縁前方のとinfralimbicのmPFC、NACのコアとシェルと基底外側および中央皮質内側AMY?...

脳ドーパミン（DA）が提案されたヘドニック1,2、努力関連の3と行動の習慣ベース4,5のメカニズムを通じて、口当たりのよい糖の摂取に中央応答に関与しています。これらの効果に関与する主要なDA経路は、腹側被蓋野（VTA）に由来し、側坐核（NAC）コアとシェル、基底外側および中央皮質内側扁桃体（AMY）、および縁前方のとinfralimbic内側へプロジェクト前頭前皮質（のmPFC）（レビュー6,7を参照）。 VTAは、ショ糖摂取8,9に関与している、とDA放出はNAC 10-15、AMY 16,17とのmPFC 18-20で砂糖の摂取後に観察されます。脂肪の摂取量はまた、DA NACは21を解放刺激し、背側線条体（尾状核被殻）への別のDA-豊富な投影ゾーンはまた、DA媒介送り22,23と関連していました。ケリー24-27は 、これらの複数のプロジェクトと提案しこのDA媒介システムのイオンゾーンは広範かつ緊密な相互接続28-34を介して統合された、インタラクティブな分散型の脳のネットワークを形成しました。 糖35-37および脂肪38-40の摂取量を減らすためにDA D1およびD2受容体アンタゴニストの能力に加えて、DAシグナリングはまた、コンディショニングフレーバーの嗜好（CFP）を生成する糖および脂肪の能力を媒介に関与しています41- 46。 NAC、AMYかのmPFC 47-49にDA D1受容体拮抗薬のマイクロインジェクションは、胃内グルコースによって誘発されたCFPの取得をなくします。 mPFCにDA D1またはD2受容体拮抗薬のいずれかの微量注入は、フルクトース-CFP 50の買収を排除するのに対し、フルクトース-CFPの取得及び発現が示差NACとAMY 51,52にDA拮抗薬によってブロックされています。 C-fosの技術53,54は、神経activatioを調査するために採用されていますnは、口当たりの良い摂取と神経の活性化によって誘導されます。用語「C-fosの活性化」とは、原稿全体で使用され、かつ作動ニューロンの脱分極中のc-Fosタンパク質の増加した転写により定義されます。ショ糖の摂取量は、NAC 55-57で、コア中央AMY核、VTAだけでなく、シェルでFOS様免疫反応性（FLI）を増加したが、ありません。偽摂食ラットにおけるショ糖摂取量は有意AMYとNACにFLIを増加ではなく、VTA 58、胃内スクロースまたはグルコース注入が大幅にNACとAMY 59,60の中央部と基底外側核においてFLIを増加させました。スケジュールされた飼料のアクセスにショ糖の繰り返し添加はNACシェルとコア61と同様のmPFCにFLIを増加させました。スクロース濃度のダウンシフトパラダイムが最大のFLIの増加は基底外側AMYとNACで発生したことを明らかにではなく、VTA 62。以下のコンディショニング、砂糖関連の自然REWAの絶滅目の行動は基底外側AMYとNAC 63にFLIを増加させました。また、トーンにペアリング砂糖の可用性は、その後側底AMY 64にFLIレベルを増加させるトーンをもたらしました。高脂肪の摂取量も、NACとのmPFCサイト65-67でFLIを増加させました。 以前に引用された研究のほとんどは、報酬に関連した分散型の脳のネットワーク24-27の識別に関する情報を提供していない単一のサイトにおけるc-fosの活性化に砂糖と脂肪の効果を調べました。また、研究の多くはまた、潜在的により調べることができたNAC（コアとシェル）、AMY（基底外側および中央皮質内側）とのmPFC（縁前方のとinfralimbic）のサブ領域の相対的な寄与を描写しませんでしたc-Fosのマッピング68に優れた空間、単一セルの解像度の利点。当研究室で69最近使用されたのc-fosの活性化と同時にVTA DA経路における測定の変化とそのプロジェクションゾーン（NAC、AMYとのmPFC）ラットにおける脂肪と糖の新規摂取後。本研究では、AMY、同時に6異なる溶液（コーン油、ブドウ糖、果糖、サッカリン、水及び脂肪乳剤コントロール）への急性曝露は差動でNACのサブエリアにFLIを活性化するかどうかを分析するための手続きと方法論的な手順を説明しますmPFCだけでなく、背側線条体。関連サイトでの変化と相関1の特定の部位の変化は、それによって、分散脳のネットワーク24-27のためのサポートを提供するか否かの各サイトと決意でFLIに重大な影響の確認を許可された差異のこの同時検出。試験されたこれらの手順は、VTA、縁前方のとinfralimbicのmPFC、NACのコアとシェル、および基底外側および中央皮質内側AMY）だけでなく、背側線条体whetherコーディネート表示していましたし、経口、無条件摂取後同時FLIの活性化グルコース（8％）、フルクトース（8％）、コーン油（3.5％）およびサッカリン（0.2％）溶液。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:273px;">Equipment</td>
			<td style="width:195px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
			<td style="width:19px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sprague-Dawley rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>CD-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Wire Mesh Cages</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>30-Cage rack</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat Chow</td>
			<td>PMI Nutrition International</td>
			<td>5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taut Metal Spring</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rat Weighing Scale</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nalgene Centrifuge Tubes</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>10-0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber Stopper</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Metal Sippers</td>
			<td>Lab Products, Seaford, DE</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saccharin</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>82385-42-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kool-Aid, Cherry</td>
			<td>Kool-Aid</td>
			<td>Commerical</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kool-Aid, Grape</td>
			<td>Kool-Aid</td>
			<td>Commercial</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fructose</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>F0127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glucose</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Corn Oil</td>
			<td>Mazzola</td>
			<td>Commerical</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xanthan Gum</td>
			<td>Sigma Chemical Co</td>
			<td>11138-66-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sliding Microtome</td>
			<td>Microm International</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neurolucida Camera</td>
			<td>MBF Bioscience</td>
			<td colspan="2">Software application</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gelatin-coated Slides</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>12-550-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover glass</td>
			<td>Fisher Scientific Company</td>
			<td>12-545-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Golden Nylon Brushes</td>
			<td>Loew-Cornell&#160;</td>
			<td>2037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Natural Hair Sable&#160;</td>
			<td>Loew-Cornell&#160;</td>
			<td>2022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24 Well Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 Well Plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1L Pyrex bottles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1395-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue insert (tissue strainer)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>7200214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E10 for 1-10ul&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E100 for 20-100ul</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>E200 for 50-200ul</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td colspan="2">E1000 for 100-1000ul</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eagle pipettes&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td colspan="2">E5000 for 1000-5000ul&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips .1-10ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips 5-200ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Universal Tips 500-5000ul</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blade Vibroslice 100</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>BLADE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DPX Mounting Medium&#160;</td>
			<td>Electron Microscopy&#160;</td>
			<td>13510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15mL centrifuge tubes</td>
			<td>Biologix Research Co.</td>
			<td>10-0501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Slide Boxes</td>
			<td>Biologix Research Co.</td>
			<td>41-6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Orbital Shaker&#160;</td>
			<td>Madell Corporation&#160;&#160;</td>
			<td>ZD-9556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">weigh boats&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">5mL disposable pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-711-5AM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Stereo Investigator Software</td>
			<td>Micro Bright Field</td>
			<td colspan="2">Software application</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Granular</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phophate Monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S468-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Phosphate Diphasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydrogen Peroxide&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H324-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SafeClear II&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-044-192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methanol&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A412-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal Goat Serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Vector</td>
			<td>BA-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ABC Kit Peroxidase Standard</td>
			<td>Vector</td>
			<td>PK-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-cFos (Ab-5) Rabbit</td>
			<td>EMD chem/Cal Biochem</td>
			<td>PC38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X 100</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>X-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3,3&#39; diaminobenzidine tetra hydrochloride&#160;</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>D5905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Hydroxide</td>
			<td>SigmaAldrich</td>
			<td>5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Primary TH anti body</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Euthosol</td>
			<td>Virbac AH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simultaneous detection of c-fos activation from mesolimbic and mesocortical dopamine reward sites following naive sugar and fat ingestion in rats

この研究は、ラットにおける脳内のドーパミン（DA）経路上の脂肪と砂糖の新規摂取の効果を評価するための細胞のc-fosの活性化を使用しています。糖や脂肪の摂取量は、その生来の観光スポットだけでなく、学んだ嗜好によって媒介されます。脳ドーパミン、特にメソ大脳辺縁系と腹側被蓋野（VTA）からメソ - 皮質突起が、これらの未学習と学習した応答の両方に関与しています。いくつかのサイトと送信機/ペプチドシステムが対話前記分散脳ネットワークの概念は、口当たりのよい食物摂取を媒介することが提案されているが、経験的に、そのような行動を示す限られた証拠があります。したがって、砂糖の摂取は、DA放出を誘発し、側坐核を含む個別VTA DA投影ゾーンからのc-fosの様免疫反応性（FLI）（NAC）、扁桃体（AMY）を増加させ、前頭前皮質（のmPFC）だけでなく、背側線条体を内側。これらのサイトへの選択的DA受容体拮抗薬のさらに、集中管理糖または脂肪によって誘発さ条件付け味の好みの取得と発現を低下させる差別的です。これらのサイトは砂糖や脂肪の摂取量に応じて、分散脳のネットワークとして相互作用するかどうかを確認することにより、一つのアプローチは、VTAとその主要mesotelencephalic DA投影ゾーン（NACの縁前方のとinfralimbicのmPFC、コアとシェル、かどうかを評価連立することであろう基底外側および中央皮質内側AMY）だけでなく、背側線条体はコーン油（3.5％）、グルコース（8％）、フルクトース（8％）とサッカリン（0.2の経口、無条件摂取した後に調整され、同時FLIの活性化を表示するであろう％）ソリューション。このアプローチは、げっ歯類で口当たりの良い食物の摂取に報酬関連の学習を研究するために、関連する脳部位で同時に携帯のc-fosの活性化を使用することの実現可能性を同定することに成功した最初のステップです。

以下に記載されている全ての代表的な結果は、以前に69を公表されており、および技術の有効性を示すには「コンセプトの証明」をサポートするために、ここに再提示されています。 ソリューション摂取 ベースラインサッカリン摂取量の有意差は、全ての動物（F（3,108）= 57.27、P &lt;0.001）摂取量...

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Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats

本研究の目的は、ラットの脂肪と砂糖の新規摂取後のドーパミン経路と端末サイトにおける同時変化を測定するために、携帯のc-fosの活性化を使用して、信頼性の高い免疫組織学的手法を描くことで報酬関連の分散型の脳のネットワークを識別することです。

ラットにおけるナイーブ砂糖と脂肪の摂取後の中脳辺縁系と中間皮質ドーパミン報酬サイトからのc-Fosの活性化の同時検出

This study uses cellular c-fos activation to assess effects of novel ingestion of fat and sugar on brain dopamine (DA) pathways in rats. Intakes of sugars ...

simultaneous-detection-c-fos-activation-from-mesolimbic-mesocortical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

9.0K ビュー.  CUNY, New York, NY. 本研究の目的は、ラットの脂肪と砂糖の新規摂取後のドーパミン経路と端末サイトにおける同時変化を測定するために、携帯のc-fosの活性化を使用して、信頼性の高い免疫組織学的手法を描くことで報酬関連の分散型の脳のネットワークを識別することです。 

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Simultaneous fMRI and Electrophysiology in the Rodent Brain

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in which functional MRI data and in vivo intracortical recording can be performed simultaneously. The combination of MRI and electrical recording is technically challenging because the electrodes used for recording distort the MRI images and the MRI acquisition induces noise in the electrical recording. To minimize the mutual interference of the two modalities, glass microelectrodes were used rather than metal and a noise removal algorithm was implemented for the electrophysiology data. In our studies, two microelectrodes were separately implanted in bilateral primary somatosensory cortices (SI) of the rat and fixed in place. One coronal slice covering the electrode tips was selected for functional MRI. Electrode shafts and fixation positions were not included in the image slice to avoid imaging artifacts. The removed scalp was replaced with toothpaste to reduce susceptibility mismatch and prevent Gibbs ringing artifacts in the images. The artifact structure induced in the electrical recordings by the rapidly-switching magnetic fields during image acquisition was characterized by averaging all cycles of scans for each run. The noise structure during imaging was then subtracted from original recordings. The denoised time courses were then used for further analysis in combination with the fMRI data. As an example, the simultaneous acquisition was used to determine the relationship between spontaneous fMRI BOLD signals and band-limited intracortical electrical activity. Simultaneous fMRI and electrophysiological recording in the rodent will provide a platform for many exciting applications in neuroscience in addition to elucidating the relationship between the fMRI BOLD signal and neuronal activity.

We have developed a method for simultaneous functional magnetic resonance imaging and electrophysiological recording in the rodent brain, providing a platform for the investigation of the relationship between neural activity and the blood oxygenation level dependent (BOLD) MRI signal.

齧歯類の脳における同時fMRIと電気生理学

To examine the neural basis of the blood oxygenation level dependent (BOLD) magnetic resonance imaging (MRI) signal, we have developed a rodent model in ...

神経科学

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after injury (Teng et al., 2006). It is recognized that transcriptional programs essential for neurite and axonal outgrowth are 
reactivated upon injury in the PNS (Makwana et al., 2005). However the tools available to analyze neuronal gene regulation in vivo are limited and 
often challenging.
The dorsal root ganglia (DRG) offer an excellent injury model system because both the CNS and PNS are innervated by a 
bifurcated axon originating from the same soma. The ganglia represent a discrete collection of cell bodies where all transcriptional events occur, 
and thus provide a clearly defined region of transcriptional activity that can be easily and reproducibly removed from the animal. Injury of nerve 
fibers in the PNS (e.g. sciatic nerve), where axonal regeneration does occur, should reveal a set of transcriptional programs that are distinct from 
those responding to a similar injury in the CNS, where regeneration does not take place (e.g. spinal cord). Sites for transcription factor binding, 
histone and DNA modification resulting from injury to either PNS or CNS can be characterized using chromatin immunoprecipitation (ChIP). 
Here, we describe a ChIP protocol using fixed mouse DRG tissue following axonal injury. This powerful combination provides a means for characterizing the pro-regeneration chromatin environment necessary for promoting axonal regeneration.

We present a method for chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury. The approach can be used to identify specific transcription factor binding sites and epigenetic modification of histone and DNA important for the regeneration of injured axons in both the peripheral and central nervous system.

軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

ラットのショ糖の渇望のインキュベーションを評価するための一般的な方法

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated. Thus, simultaneous recordings of neuronal activity and behavior are essential to correlate brain activity to behavior. For such behavioral analyses, the fruit fly, Drosophila melanogaster, allows us to incorporate genetically encoded calcium indicators such as GCaMP1, to monitor neuronal activity, and to use sophisticated genetic manipulations for optogenetic or thermogenetic techniques to specifically activate identified neurons2-5. Use of a thermogenetic technique has led us to find critical neurons for feeding behavior (Flood et al., under revision). As a main part of feeding behavior, a Drosophila adult extends its proboscis for feeding6 (proboscis extension response; PER), responding to a sweet stimulus from sensory cells on its proboscis or tarsi. Combining the protocol for PER7 with a calcium imaging technique8 using GCaMP3.01, 9, I have established an experimental system, where we can monitor activity of neurons in the feeding center &#x2013; the suboesophageal ganglion (SOG), simultaneously with behavioral observation of the proboscis. I have designed an apparatus ("Fly brain Live Imaging and Electrophysiology Stage": "FLIES") to accommodate a Drosophila adult, allowing its proboscis to freely move while its brain is exposed to the bath for Ca2+ imaging through a water immersion lens. The FLIES is also appropriate for many types of live experiments on fly brains such as electrophysiological recording or time lapse imaging of synaptic morphology. Because the results from live imaging can be directly correlated with the simultaneous PER behavior, this methodology can provide an excellent experimental system to study information processing of neuronal networks, and how this cellular activity is coupled to plastic processes and memory.

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, extends its proboscis for feeding, responding to a sugar stimulus from its proboscis or tarsus. I have combined observations of the proboscis extension response (PER) with a calcium imaging technique, allowing us to monitor the activity of neurons in the brain, simultaneously with behavioral observation.

同定されたニューロンと摂食行動からカルシウム信号の同時記録キイロショウジョウバエ</em

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated.  Thus, ...

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can produce a rewarding effect that strengthens action-outcome associations and reinforces future behavior directed at obtaining these foods. Increasing evidence that the rewarding effects of energy-dense foods play a profound role in overeating and the development of obesity has heightened interest in studying the genes, molecules and neural circuitry that modulate food reward1,2. The rewarding impact of different stimuli can be studied by measuring the willingness to work to obtain them, such as in operant conditioning tasks3. Operant models of food reward measure acquired and voluntary behavioral responses that are directed at obtaining food. A commonly used measure of reward strength is an operant procedure known as the progressive ratio (PR) schedule of reinforcement.4,5 In the PR task, the subject is required to make an increasing number of operant responses for each successive reward. The pioneering study of Hodos (1961) demonstrated that the number of responses made to obtain the last reward, termed the breakpoint, serves as an index of reward strength4. While operant procedures that measure changes in response rate alone cannot separate changes in reward strength from alterations in performance capacity, the breakpoint derived from the PR schedule is a well-validated measure of the rewarding effects of food. The PR task has been used extensively to assess the rewarding impact of drugs of abuse and food in rats (e.g.,6-8), but to a lesser extent in mice9. The increased use of genetically engineered mice and diet-induced obese mouse models has heightened demands for behavioral measures of food reward in mice. In the present article we detail the materials and procedures used to train mice to respond (lever-press) for a high-fat and high-sugar food pellets on a PR schedule of reinforcement. We show that breakpoint response thresholds increase following acute food deprivation and decrease with peripheral administration of the anorectic hormone leptin and thereby validate the use of this food-operant paradigm in mice.

The present report details the protocol employed to measure the rewarding effects of high-fat food in mice using a progressive ratio operant conditioning task.

プログレッシブ比マウスの嗜好性は高脂肪·高砂糖食の応答

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

Single Cell Measurement of Dopamine Release with Simultaneous Voltage-clamp and Amperometry

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is terminated by diffusion2-3, extracellular enzymes4, and membrane transporters5. The dopamine transporter, located in the peri-synaptic cleft of dopamine neurons clears the released amines through an inward dopamine flux (uptake). The dopamine transporter can also work in reverse direction to release amines from inside to outside in a process called outward transport or efflux of dopamine5. More than 20 years ago Sulzer et al. reported the dopamine transporter can operate in two modes of activity: forward (uptake) and reverse (efflux)5. The neurotransmitter released via efflux through the transporter can move a large amount of dopamine to the extracellular space, and has been shown to play a major regulatory role in extracellular dopamine homeostasis6. Here we describe how simultaneous patch clamp and amperometry recording can be used to measure released dopamine via the efflux mechanism with millisecond time resolution when the membrane potential is controlled. For this, whole-cell current and oxidative (amperometric) signals are measured simultaneously using an Axopatch 200B amplifier (Molecular Devices, with a low-pass Bessel filter set at 1,000 Hz for whole-cell current recording). For amperometry recording a carbon fiber electrode is connected to a second amplifier (Axopatch 200B) and is placed adjacent to the plasma membrane and held at +700 mV. The whole-cell and oxidative (amperometric) currents can be recorded and the current-voltage relationship can be generated using a voltage step protocol. Unlike the usual amperometric calibration, which requires conversion to concentration, the current is reported directly without considering the effective volume7. Thus, the resulting data represent a lower limit to dopamine efflux because some transmitter is lost to the bulk solution.

The amperometric technique measures dopamine release from a single cell by detecting the oxidative current produced by spontaneous dopamine oxidization. Simultaneous voltage clamp and amperometry methodology reveal the mechanistic relationship between the overall "activity" of dopamine transporter and the regulatory role of this activity on the reverse transport of dopamine.

同時に電圧クランプとアンペロとドーパミン放出の単一細胞計測

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is ...

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five decades of inquiry into the molecular deficiencies associated with dopamine regulation. The majority of these inquiries of dopamine regulation in the brain focus upon the molecular basis for its regulation in the terminal field regions of the nigrostriatal and mesoaccumbens pathways; striatum and nucleus accumbens. Furthermore, such studies have concentrated on analysis of dopamine tissue content with normalization to only wet tissue weight. Investigation of the proteins that regulate dopamine, such as tyrosine hydroxylase (TH) protein, TH phosphorylation, dopamine transporter (DAT), and vesicular monoamine transporter 2 (VMAT2) protein often do not include analysis of dopamine tissue content in the same sample. The ability to analyze both dopamine tissue content and its regulating proteins (including post-translational modifications) not only gives inherent power to interpreting the relationship of dopamine with the protein level and function of TH, DAT, or VMAT2, but also extends sample economy. This translates into less cost, and yet produces insights into the molecular regulation of dopamine in virtually any paradigm of the investigators' choice.
We focus the analyses in the midbrain. Although the SN and VTA are typically neglected in most studies of dopamine regulation, these nuclei are easily dissected with practice. A comprehensive readout of dopamine tissue content and TH, DAT, or VMAT2 can be conducted. There is burgeoning literature on the impact of dopamine function in the SN and VTA on behavior, and the impingements of exogenous substances or disease processes therein 1-5. Furthermore, compounds such as growth factors have a profound effect on dopamine and dopamine-regulating proteins, to a comparatively greater extent in the SN or VTA 6-8. Therefore, this methodology is presented for reference to laboratories that want to extend their inquiries on how specific treatments modulate behaviour and dopamine regulation. Here, a multi-step method is presented for the analyses of dopamine tissue content, the protein levels of TH, DAT, or VMAT2, and TH phosphorylation from the substantia nigra and VTA from rodent midbrain. The analysis of TH phosphorylation can yield significant insights into not only how TH activity is regulated, but also the signaling cascades affected in the somatodendritic nuclei in a given paradigm.
We will illustrate the dissection technique to segregate these two nuclei and the sample processing of dissected tissue that produces a profile revealing molecular mechanisms of dopamine regulation in vivo, specific for each nuclei (Figure 1).

Dopamine is distinctly regulated in the midbrain nuclei, which contain the cell bodies and dendrites of the dopamine neurons. Here we describe a dissection and sample-handling approach to maximize results, and thus conclusions and insights, on dopamine regulation in the midbrain nuclei of the substantia nigra (SN) and ventral tegmental area (VTA) in rodents.

黒質や腹側被蓋野のドーパミン規制の包括的なプロファイリング

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise from extra-retinal sources. Ex vivo ERG provides an efficient method to dissect the function of retinal cells directly from an intact isolated retina of animals or donor eyes. In addition, ex vivo ERG can be used to test the efficacy and safety of potential therapeutic agents on retina tissue from animals or humans. We show here how commercially available in vivo ERG systems can be used to conduct ex vivo ERG recordings from isolated mouse retinas. We combine the light stimulation, electronic and heating units of a standard in vivo system with custom-designed specimen holder, gravity-controlled perfusion system and electromagnetic noise shielding to record low-noise ex vivo ERG signals simultaneously from two retinas with the acquisition software included in commercial in vivo systems. Further, we demonstrate how to use this method in combination with pharmacological treatments that remove specific ERG components in order to dissect the function of certain retinal cell types.

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Ex vivo ERG can be used to record electrical activity of retinal cells directly from isolated intact retinas of animals or humans. We demonstrate here how common in vivo ERG systems can be adapted for ex vivo ERG recordings in order to dissect the electrical activity of retinal cells.

同時<em&gt; ex vivoで</emによる二つの網膜の&gt;機能テスト<em&gt; in vivoで</em&gt;電図システム

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the electrical responses of the retina to light stimulation, while the VEP measures the corresponding functional integrity of the visual pathways from the retina to the primary visual cortex following the same light event. The ERG waveform can be broken down into components that reflect responses from different retinal neuronal and glial cell classes. The early components of the VEP waveform represent the integrity of the optic nerve and higher cortical centers. These recordings can be conducted in isolation or together, depending on the application. The methodology described in this paper allows simultaneous assessment of retinal and cortical visual evoked electrophysiology from both eyes and both hemispheres. This is a useful way to more comprehensively assess retinal function and the upstream effects that changes in retinal function can have on visual evoked cortical function.

This protocol describes simultaneous measurement of electroretinogram and visual evoked potentials in anesthetized rats.

麻酔ラットにおける電図および視覚誘発電位の同時記録

The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) neurotransmission is strongly associated with several central nervous system-associated diseases such as Parkinson&#39;s disease, attention-deficit-hyperactivity disorder and drug addiction1,2,3,4. Delineating disease mechanisms involving DA imbalance is critically dependent on animal models to mimic aspects of the diseases, and thus protocols that assess specific parts of the DA homeostasis are important to provide novel insights and possible therapeutic targets for these diseases.
Here, we present two useful experimental protocols that when combined provide a functional read-out of the DAergic system in mice. Biochemical and functional parameters on DA homeostasis are obtained through assessment of DA levels and dopamine transporter (DAT) functionality5. When investigating the DA system, the ability to reliably measure endogenous levels of DA from adult brain is essential. Therefore, we present how to perform high-performance liquid chromatography (HPLC) on brain tissue from mice to determine levels of DA. We perform the experiment on tissue from dorsal striatum (dStr) and nucleus accumbens (NAc), but the method is also suitable for other DA-innervated brain areas.
DAT is essential for reuptake of DA into the presynaptic terminal, thereby controlling the temporal and spatial activity of released DA. Knowing the levels and functionality of DAT in the striatum is of major importance when assessing DA homeostasis. Here, we provide a protocol that allows to simultaneously deduce information on surface levels and function using a synaptosomal6 DA uptake assay.
Current methods combined with standard immunoblotting protocols provide the researcher with relevant tools to characterize the DAergic system.

Synaptosomal dopamine uptake and high-performance liquid chromatography analysis represent experimental tools to investigate dopamine homeostasis in mice by assessing the function of the dopamine transporter and levels of dopamine in striatal tissue, respectively. Here we present protocols to measure dopamine tissue content and assess the functionality of the dopamine transporter.

高速液体クロマトグラフィー分析とシナプトソーム ドーパミンによるマウスにおけるドーパミン作動性恒常性の評価

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...