この方法により、インタクト中枢神経系内の生体内のタンパク質ダイナミクスを調べ、神経科学や免疫学の問題に対処することができます。この手順の主な利点は、画像取得、短い手術時間、ガス麻酔へのオペレータ暴露の減少、および安価なカスタマイズ可能なバックプレートのための優れた運動安定性です。この方法の視覚的なデモンストレーションは、手順のラミネクトミーステップ中に密接に基礎となる神経系組織を損傷することなく骨を除去することが困難であるため、重要である。
手順を開始する前に、3D コンピュータ支援設計ソフトウェアを使用して、指定された寸法に対するモデルを作成します。だから、私たちは3次元オブジェクトであるオブジェクトを持っています。私ができることは、印刷版の設定を置くことができるということです。
だから私がこれを編集を開いたら、詳細設定に進み、これらの設定をすべて見せるためのウィンドウを開きます。3Dプリンタでノズル温度を摂氏205度、ベッド温度を摂氏45度、印刷速度を毎秒45ミリメートルに設定します。0.4ミリメートルの熱いentノズルと0.2ミリメートルの層の高さを使用して、バックプレートを印刷します。
次に、印刷されたバックプレートの構造的完全性を視覚的に評価します。グロス構造障害は印刷上の欠陥を示します。バックプレートの準備ができたら、8〜12週齢の麻酔マウスの頭部を外科用拘束剤のイヤーバーの間のヒートパッドに置き、動物の目に軟膏を塗布します。
つま先ピンチに対する応答の欠如を確認した後、11センチメートルのロストラルを下胸部上部腰椎領域上の垂直切開にして、皮膚を腹膜から分離します。皮膚の下に残っている透明な結合組織を剥がして表面的な筋肉を露出させるために鉗子を使用してください。ターゲット椎骨の残りの深部筋肉と一緒に泡の外科用槍で筋肉を置き換えます。
バックプレートのシートを作成するには、胸部11の後部の側面と胸部13の前側面から筋肉をクリアする。必要に応じて腱から残りの筋肉を除去するために鉗子を使用する。すべての筋肉を取り除くと、脊髄を視覚化して操作するための十分なスペースが得られるまで、慎重に鉗子で腱を切断する。
椎間空間の硬膜、半透明の層骨、骨の下の中央の表面血管、および前放射動脈がはっきりと見えるのを確認する。暖かい人工脳脊髄液で領域を濡らし、脊髄の長い軸に平行なストレートストロークを使用して層状骨を薄くするためにマイクロドリルを使用します。表面的な棘のプロセスを鉗子でそっとつかみ、椎骨を持ち上げます。
骨は簡単に持ち上げるはずです。4番の鉗子を使用して骨の破片を取り除き、必要に応じて外科的槍と穏やかな安定した圧力で出血を制御します。その後、暖かい人工脳脊髄液で組織をすすいします。
カバーガラスの注入のために、露出したコードに3ミリメートルのホウケイ酸カバーガラスを静かに塗布する。ガラスの端に39度の摂氏3%のアガロースを加え、カバーガラス表面の下にアガロースを描くために毛細血管作用を可能にするために小さなへらを使用してください。胸部レベル11および13椎骨の脊椎において、無傷の隣接する椎骨の露出した骨関節プロセスに組織接着剤を塗布する。
隣接する腱および横のプロセスの上に、ラミネクトミー部位の周りのリングに追加の組織接着剤を塗布します。次に、新しいヘラを使用して、加速剤と混合した歯科用セメントを組織の粘着層に塗布し、カバーガラスの窓の上に中央の外科フィールドにバックプレートを置きます。歯科用セメントの複数の薄い層を適用すると、より強いバックプレートの接着になりますが、歯科用セメントが乾燥し始める前にすぐにバックプレートを配置してください。
歯科用セメントを10分間硬化させた後、バック・プレイスの内部ベースと下側に追加の接着剤を充填します。薄い層に歯科用セメントを適用すると、セメントがカバーガラスやアガロースに広がるリスクを減らすのに役立ち、プロトコル全体を損なう可能性があります。歯科用セメントが乾燥したら、フォークバックプレートホルダーを窓の上の適切な位置に塗布し、バックプレートをバックプレートホルダーにねじ込みます。
その後、漏れのテストのためにバックプレートに生理焼け地を適用します。動物および外科プラットホームはカバーガラスの窓を通してイメージ投射のための2つの光子顕微鏡の光学テーブルに移すことができる。本代表的実験では、EGFP陽性クローディン-5を、血管叢全体にわたって蛍光標識されたタイトな接合部内で可視化した。
Z投影における密接点構造の明確な線引きは、ラミニング、窓の配置、およびバックプレートの移植が成功した後に最小のXY画像変位が生成されることを示しています。この手順を試みる間、このマイクロサージャストは困難であり、習得に時間がかかるかもしれないことを覚えておくことが重要です。しかし、一度習得すると、この手術は約30分で行うことができます。
この手順に従って、2つの光子顕微鏡および生体内イメージングのような他の方法は、神経血管リモデリングおよび脊髄を含む他の疾患プロセスに関する追加の質問に答えるために行うことができる。
