このビデオでは、直交性右後肢、大腿中型移植ラットの実行方法について詳しく説明します。ドナーラット右後肢は、大腿中レベルで切断され、その後、氷の上に保存されます。レシピエントラット右後肢も中腿レベルで切断される。
ドナーラットの四肢は、その後、レシピエントラットに取り付けられます。骨、動脈、静脈、神経、筋肉、皮膚系を再結合する方法について説明します。四肢移植は、より具体的には、血管化複合同種移植、VCA、広い治療上の約束を有する。
しかし、それは現在、技術によって制限されています, 免疫抑制, そして、機能性神経運動回復不良.私たちのモデルは、手縫い血管吻合や神経凝集など、時間テストされた細心の注意を払った微小外科的技術を強調しています。私たちは1年以上でこれらの手術の200以上を行いました。
最初のマイクロ外科医への最初の学習曲線がありますが、このビデオを使用して私たちの方法と専用の練習へのコミットを学ぶことによって、マイクロサージェントはこのモデルを習得することができます。すべての実験は、NIH国立衛生研究所の実験動物のケアと使用のためのガイドに従って行われ、ノースウェスタン大学動物ケアと使用委員会によって承認されました。具体的な手順は、プロトコル IS 00001663 で実行されました。
手術時に体重が8~16週齢のラットを選ぶ。ラットの後肢の毛皮をトリミングする前に気化器を通して5%イモルランで全身麻酔を誘発する。2〜2.5%の間の麻酔を維持するために鼻コーンを使用して、下にヒーターを持つ手術台の上にラットを配置します。
70%の擦過アルコールで無毛の皮膚を消毒し、滅菌ガーゼで外科分野を保護します。適切なマイクロ外科顕微鏡とここに示す微小手術器具を使用して、簡単にアクセスできる双極性および単極電気コーサリーと共に、解剖を開始する準備が整います。はさみを使用して、右後肢の周りを周回および皮膚切開します。
りぎざりの折り目を、直ちに、歯の靱帯とほぼ同じレベルで開始し、周切開を完了するために横方向に後部を伸ばす。そして、切開の真下の筋肉層を露出させ、筋肉層からちょうど作成された近位皮膚フラップにつながる表面上皮管を解剖し、焼灼した。近位フラップを膝に対して下皮的に皮膜靱帯に反射し、遠位皮膚フラップを膝に対して下線で折る。
ワイヤリトラクタまたはロールガーゼを使用して、フィールドを露出させます。ラットの脳の血管の解剖は人間に似ており、横から内側へ、神経、動脈、静脈が見られる。大腿神経を解剖し、可能であれば分岐に近いインジナル靭帯で鋭く分割する。
分裂した神経を劣って引き込み、湿ったガーゼの下に覆われて安全に邪魔をし続ける。大腿動脈と静脈に注意を向けると、血管を直接扱う代わりに、4センチメートルの長さ7-0シルクのネクタイを使用して、外傷を負って引き込みます。今細心の注意を払うことは、あなたの最終的なアナストモティックな結果を向上させます.
7-0シルクのネクタイで大腿骨の容器のすべての枝をリゲート。ネクタイの間で枝を分割します。分裂を必要とする動脈および静脈枝には、表面的な眼屈の回腸および筋肉の血管が含まれる。
表面的なサーカムフレックス腸骨は通常最も大きく、人間のプロファンダ大腿骨と同様に深く潜るように見えるが、プロファンダはラットに存在しない。最も高い属性および伏在枝のような大腿血管のより遠位の枝は、通常分裂を必要としない。今、可能な限り、結び手靭帯に近い7-0シルクのネクタイを持つ大腿動脈をリゲートし、ネクタイ間で分割します。
動脈と同様に、大腿静脈をリゲートして分ける。動脈と静脈の両方を劣った、安全に邪魔して、以前に覆われた大腿神経と一緒に湿ったガーゼの下で覆われた。腹側筋群を解剖し、発生する目に見える血管を焼灼するように注意する。
止血症への注意は、後で再拡散中のレシピエント失血を最小限に抑えます。腹側筋群の深部では、坐骨神経の近位をその枝に識別し、鋭く分ける。3つの坐骨枝はすべて通常、目に見える、脛骨、腹膜およびsuralである。
3つすべてがドナーの四肢に保存されるべきです。第4の皮枝は、典型的には、この解剖では見られない。細心の止まり止めで中腿レベルで残りの腹側と後筋群を分割終了します。
筋肉を完全に分割するために、四肢の内側を引っ込める必要があるかもしれません。ハンドヘルドコードレスロータリーソーを使用して、シャフトの中に大腿骨の骨をトランセクトします。手足はドナーから解放されるようになりました。
ドナーから四肢移植片を取り除いた後、シルクの結ばれた端を移植片側の大腿動脈および静脈切り株から切断し、それによって血管を再び開ける。24ゲージの血管カテーテルを移植片動脈の切り株に挿入し、5ミリリットルの氷冷正常生理食塩水で希釈した250の国際単位のヘパリンで移植片を洗い流し、開いた静脈から流れ出るのを注意深く見守る。ゆっくりと、約3分間、移植片を静かに洗い流します。
過剰な強引な洗い流しは、内皮を損傷する可能性があります。移植まで氷バケツに入れ子にした冷たい生理食い皿に移植片を入れます。両側性乳房間術でドナーラットを安楽死させる。
受付側の手術はドナー手術と同様に始まり、ラットを麻酔し、毛皮をトリミングし、皮膚のフラップを反射して、大腿神経、動脈、静脈を解剖して、うつねりの周切開を行う。そして、先に述べたように同じ分岐容器を連結する。しかし、この手術中、大腿神経はドナーよりも遠方に分割するが、可能であれば分岐に近い。
大腿動脈と静脈を分裂して解放し、マイクロサージカルブルドッグクランプでそれぞれインギナル靭帯のレベルでそれらを補間する。前に説明したように手術を続け、必要に応じて四肢の内側を引き込みながら、太ももの腹側の筋肉を細心の注意を払って細心の止まりで大腿部の腹側の内腹筋を分割する。坐骨神経の近位を分岐点に識別して分割し、回転鋸を使用してシャフトの中間で大腿骨をトランセクトする。
受け身の右後肢を取り除き、地元の動物管理および使用委員会のガイドラインに従って適切に処分してください。この段階では、鼻コーンを通してイオブルランを1〜1.5%に下げるのは非常に重要です。この痛みの少ない部分の間にあまりにも多くの麻酔は、ラットの死につながるでしょう。
骨を一緒に凝集する時が過大な時間です。ハンドヘルドロータリーソーを使用して、ドナーとレシピエント大腿骨のカットエンドの両方からの不規則性を削ります。大腿骨内髄腔ロッドになる18ゲージ針のハブ端を切り落とします。
骨を操作する前に、少量の骨ワックスを大腿骨の切り取り側の端に塗布して、リーミングプロセス中の骨髄出血を軽減する。18ゲージの針を髄腔内ロッドとして使用してドナーおよびレシピエント大腿骨をcoaptする。何らかの力が必要であるが、皮質を破壊する限り、どちらの骨もリームしないでください。
必要に応じて、針を取り除き、両方の骨が針の上に滑らかにフィットするように、針を不適切な長さにトリミングし、針が骨の間に現れないようにします。ガーゼのパッドや小さな岩やドナーの手足の下に粘土をモデリングするなど、小さなサポートを配置して緊張を防ぐ。8~10の単純な中断5-0ポリグラクチン縫合糸で腹側筋群を再近似し、移植片が大腿骨針の周りを回転しないようにする。
これは、アナストモーゼのための四肢の安定性を与えます.今、アナストモーセを開始します。より良い視覚化と虚血性再灌流傷害を減らすために、定期的に氷冷生理食糸で移植片および外科分野を灌漑する。
ドナーとレシピエントの大腿動脈と吻合を、緊張とループの両方を避け、シンプルな中断された10-0ナイロン縫合糸を使用してエンドツーエンドの方法で整列させます。動脈は平均6本の縫合糸を必要とする。動脈と同様に、ドナーとレシピエント大腿静脈をエンドツーエンドの方法で吻合する。
静脈は6〜8縫合糸を必要とする。寛大な冷たい生理学灌漑、非外傷性血管取扱技術、および血管の後退のための滞在縫合糸として役立つ長い尾を残すことは、効果的な微小外科的アナストモーセのための重要なツールである。両アナストモーゼに適量の止血セルロース粉末を置き、その後、静脈と動脈の近位微小外科的ブルドッグクランプを取り除く。
両方のアナストモーゼが良好な愛臭と流れを検査します。綿棒を使用して静脈を優しく突き出し、両方のアナストモーゼで良好な止頭症がないか検査します。両方のアナストモーセが満足のいくものが確認されたら、残りの長い滞在縫合尾尾を他の部分に合わせてトリミングします。
ラットを左横型の脱cubitus位置に再配置し、リベラルな電気焼灼を使用して、あらゆる再灌流筋肉出血の細心の注意を払って止血を行う。筋肉の止まりが保証されると、神経の筋肉の筋肉に注意が向きます。単純に中断された5-0ポリグラクチン縫合糸で坐骨神経の真下にある後筋群を再近似する。
ぼろぼろに見える神経切り取り端をトリミングします。エピニューラル咬傷を目指す10-0ナイロン縫合糸で坐骨神経を再近似する。8〜10の単純な中断縫合糸は通常十分です。
残りの後筋群を5-0ポリグラクチン縫合糸で再近似する。次に、4-0ポリグラクチン連続走行縫合糸で後頭皮膚を閉じます。ラットを位置を上に位置合わせし直し、10-0ナイロン縫合糸で大腿神経を再近似し、再び、エピニューラル咬傷に努める。
2~3本の単純な中断縫合糸で十分です。残りの腹側皮膚を、後側の皮膚と同じ方法で閉じます。余分な縫合糸尾を避けます, 一度目を覚ますネズミに刺激することができます.
動物が即時術後のウィンドウから出ると、彼らは神経運動回復のためにテストすることができます。ハーグリーブス試験は熱感覚をテストするために使用される。ラットを試験容器に入れ、20分間順応させた。
装置ガラスがクリーンであることが確認され、熱源が調査員の指で働いているのが確認される。テストの前に、ラットが目を覚ましており、テストされた足が赤外線運動検出器の上に配置されていることを確認してください。強度レベル90で熱エネルギーを送信します。
熱源から足を離れて移動する動物の時間遅延が記録されます。20 秒以内に動きが発生しない場合は、損傷を防ぐためにテストが中止されます。各動物の平均離脱待ち時間を計算する前に、最高値と最低値を除いて、試験された四肢ごとに5回の試験を得る。
ここでは、漫画形式の操作的なデザインを描いています。ドナーとレシピエントラットの両方の右後肢は、坐骨断断面として中腿レベルで切断される。大腿動脈、静脈、神経、坐骨神経および大腿骨は、レシピエント手術で再接続されなければならない。
このモデルは、免疫抑制と移植戦略の差動生存効果を示すために使用することができる。この技術により、長期生存が達成可能である。このモデルは感覚神経回復を調査するために使用することができ、これは術後4週間で明らかである可能性がある。
運動機能は、歩行分析プラットフォームを使用して尋問することもできます。ここでは、進行図に示すように感覚と運動回復をプローブするために使用する良好な生存特性を持つラットモデルプラットフォームを発表しました。VCAのより広いカテゴリーの下での四肢移植は、血管化された成分同種移植が広く適用可能な治療上の約束を有していないまだ満たされていない。
主な障害ライン現在の免疫抑制および神経運動回復技術。新しい技術の開発は、柔軟で堅牢で再現性の高い動物モデリングに依存します。このプラットフォームを使用して、研究者が四肢移植の複数のファセットを進めることができるようにしたいと考えています。
あなたの次のステップで見て、幸運をありがとう。
