以下の実験では、黒胡椒植物に対するPhytophthora capsiciの効果的な接種と正確なサンプリング方法を紹介します。典型的な木質のつるである黒胡椒は、経済的に重要なスパイス作物です。黒胡椒の生産は、主にPhytophthora capsiciによって引き起こされる根腐れ病の影響を受けており、産業の発展に深刻な影響を与えています。
黒胡椒植物に対するPhytophthora capsiciの効果的な接種と正確なサンプリングシステムは、植物と病原体の相互作用の研究にとって重要です。この研究の主な目的は、黒胡椒の基底頭部にPhytophthora capsiciを接種した詳細な方法論を実証し、木質ブドウ植物の接種のための参考文献を提供することである。この方法は、土壌灌漑や根の浸漬などの伝統的な接種方法によってもたらされる不安定性を解決するためのより良い方法を提供します。
実験手順。黒胡椒の挿し木は、制御された環境に2ヶ月間植えられます。Phytophthora capsiciを継代培養し、摂氏25度以下で5日間インキュベートする。
感染の日に、寒天ブロックは針で突き刺された3つの穴で覆われています。そして最後に、病気の症状を特徴付けます。感染のための黒胡椒切断植物の調製。
直交異方性の枝を長さ40センチメートル、直径0.5センチメートルに切断し、滅菌ナイフとセカテュールで下節の斜長作枝を除去した。切断された枝には、水の損失を減らすために、上部に2つの節点と5つの葉を含める必要があります。上部を平らなカットに、下部を斜めのカットにトリムします。
黒胡椒切断の発根基材を混合物に調製し、土壌および動物糞、例えば牛糞、羊糞などを1対1の比率で含む。土壌を約121°Cで20分間オートクレーブ処理した。直径30センチ、高さ50センチの飼育袋を使用して、発根基質を配置します。
基板をいっぱいにするために50度の斜面を準備します。切削材は50度の角度で配置され、基板の下に3つ以上の節が置かれた。それらは発根培地で覆われており、補助部分は培地にくっつくべきです。
最後に、挿し木は完全に浸透しました。切削加工を挿入するにはストレート切削を採用した。フィトフトラカプシチ培養物の調製。
無病のジャガイモを選んでください。ジャガイモをきれいにし、小さな正方形に切ります。800ミリリットルの二重蒸留水に200グラムのジャガイモを入れ、20分間沸騰させた。
次に、混合物をろ過します。20グラムのデキストロースを加える。混合物を1リットルに二重蒸留水で満たします。
ろ液に寒天粉末15グラムを加える。フラスコに培地を分注し、パラフィルムを使用して密封する。培地を摂氏121度で20分間オートクレーブする。
ジャガイモ寒天の計算培地をシャーレプレートに分注し、固化のために滅菌ベンチ上で冷却した。接種針をアルコール燃焼ランプを用いて加熱し、数秒間冷却することにより消毒した。滅菌接種を使用して真菌サンプルの小片を採取し、PDA上に置く。
菌糸体はプレートの約4分の3をカバーしています。培養物はさらなる実験の準備ができています。黒胡椒の感染。
基板の表面から5センチメートル離れた場所をインキュベートスポットとみなした。インキュベーション場所は、感染時間を延ばさないようにするために、根から遠く離れてはいけません。ピンチの詳細な手順は次のとおりです。
Phytophthora capsiciの菌糸体ペレットを、ストッパーボーラーを用いて回収した。特に、プレートの端にある新しく開発された菌糸体ペレットは、より高い感染活性のために優先的に選択された。75%エタノールで茎を殺菌し、接種針を使って殺菌位置に三角形の毛穴を3本取ります。
接種針を用いて接種箇所に3つの三角形の細孔を貼り付け、3つの細孔に菌糸ペレットを覆った。8時間後、毛穴は一般的に黒くなった。拡張は、インキュベーションの延長とともに拡大した。
7〜10日後、葉は黄色に変わり、黒コショウが死ぬまで落ちます。発表結果は以下の通りである。感染後、葉の黄ばみやしおれ、木部の褐変、血管の黒化など、黒胡椒の植物に症状が現れます。
ほとんどの遺伝子は、Phytophthora capsiciの接種後に、対照群と比較して異なって発現した。感染組織の組織病理学的分析により、フィトフトラ・カプシチが木部に定着していることが実証された。結論。この研究では、基底頭をピンチに刺して、効果的な接種を提供するためにそれを損傷させ、黒コショウの倍増系を使用した。
一方、このプロトコルはまた、インキュベートのための参照を提供するためのより効率的な方法を表す - 私たちの方法は、より多くの時間を与え、より短時間で動作することができる。このプロトコルは、より良い結果を提供し、1つの植物と土壌媒介病原体との間の強い相互作用を可能にする。これは目に見え、植物とその病原体との間の動的プロセスを検出するのに便利です。
私たちの方法では、黒胡椒植物の基底頭を刺して損傷を与え始めます。その後、損傷した領域をフィトフトラ・カプシチで直接覆い、水分を保った。病原体が植物に感染するように。
また、農業精密育種における植物と他の土壌媒介性植物病原菌との作用機序の研究にも有望な方法を提供しています。
