ブローバエは、義務性または通性寄生虫、および腐性屍食性である可能性のある多様なハエのグループです。寄生性種は生体組織のみを食べ、脊椎動物にミイアシスを引き起こしますが、腐死性寄生種は腐敗した有機物を食べます。通性寄生虫は、生きている物質と腐敗した物質の両方を食べ、寄生虫として生きるかどうかです。
幼虫期が最も問題となるが、雌は産卵する場所を選択するため、幼虫が餌を食べて成長する場所を主に制御する上で決定的な役割を果たします。ここで紹介する方法の全体的な目標は、幼虫の餌基質の好みと雌の産卵部位の選択の両方を評価することです。幼虫の摂食の好み。
ステップ1、寒天2%のペトリ皿の準備2%寒天でペトリ皿を準備します。そのためには、300ミリリットルの水に6グラムの細菌寒天を加え、この混合物を電子レンジで溶かします。次に、ボリュームを4つのペトリ皿に分けます。
希望する反復回数に応じて、寒天でペトリ皿の数を準備します。寒天が固まったら、ペトリ皿の両側に2つの穴をあけた直径3センチメートルの50ミリリットルの円錐形のチューブに、論文で提供されているカッティングペッターを使用して寒天に4つの穴を開けます。ステップ2、基板の調製。
新鮮な肉を血液で調製するには、抗凝固剤溶液と半分ろ過水で半分の血液である12ミリリットルの希釈した牛の血液を使用します。次に、この溶液を200グラムの新鮮な牛ひき肉に加え、よくかき混ぜます。基質間の他の汚染を避けるために、肉の種類ごとに異なる目盛りシリンダーとスプーンを使用することを忘れないでください。
腐った基質を準備するには、腐った肉200グラムに12ミリリットルのろ過水を加え、新鮮な肉と同じようにかき混ぜます。実験開始に先立ち、インキュベーター内で25°Cで5日間腐らせます。肉の基質を準備した後、寒天の穴を両側の新鮮な肉と腐った肉で埋めます。
ここに示しているように、ペトリ皿の肉の位置をランダム化することを忘れないでください。ステップ3、実験のセットアップ。摂氏25度の部屋では、光源の真下に加熱パッドをセットして、光に近づいたり反対に偏ったりする広い挙動で嗜好アッセイを均一に照らします。
次に、加熱パッドの周りの板紙をサポートとして使用して、すべてを同じレベルに保ちます。すべてのセット、加熱パッド、サポート板紙の上に黒い段ボールを置き、すべての基材の上に同じ色のパターンを保ちます。寒天と肉の基質が入った6つのシャーレを、加熱パッドに各タイプ1つずつ、加熱パッドの表面の外側に2つの基材を入れた黒い段ボールの上に置きます。
これを行うと、ペトリ皿のそれぞれに、新鮮で冷たい、腐ったと冷たい、新鮮で暑い、そして最後に腐って熱いという4つの基質を持たせることができます。基板を約10分間加熱します。ステップ4、幼虫テスト。
赤外線温度計で基板の温度を確認します。寒いほうは25°Cくらい、暑いほうは33°Cくらいです。希望の温度に達したら、ピンセットを使用して各ペトリ皿の中央に5匹の3齢幼虫を配置します。
次に、ペトリ皿に蓋をして、選択実験をちょうど10分間実行します。実験中、幼虫はペトリ皿の周りを這い回り、4つの選択肢から選択します。幼虫が逃げた場合は、ピンセットで取り、シャーレの中央に戻します。
10分後、すべての実験ペトリ皿を加熱パッドから取り出し、別の表面に置きます。次に、各基質に何匹の幼虫がいるかを数えます。色とりどりの幼虫は、選択した基質にとどまることが観察されています。
女性の産卵部位の好み。ステップ1、実験のセットアップ。この作業は、以前は黒い段ボールで覆われていた通常の棚で行うことができます。
これらの段ボールは、幼虫アッセイと同様に必要であるため、成虫の雌には視覚的な手がかりがありません。また、棚にはLEDストリップを均等に並べる必要があります。摂氏25度の部屋で、棚の中央に温熱パッドを置きます。
加熱パッドの周りの板紙をサポートとして使用して、すべてを同じ高さに保ちます。すべてのセットの上に黒い段ボール、加熱パッド、サポート板紙を置き、すべての基板の上に同じ色のパターンを保ちます。2つの異なる十字架の間にある同じ十字の2つのアームの下に加熱パッドを配置します。
これにより、棚のスペースをより有効に活用できます。実験開始前にLEDライトと加熱パッドを点灯してください。十字型のメガネは、テスト間の臭いの汚染を避けるために、常に70%エタノールで清掃することを忘れないでください。
ステップ2、基板の調製。プラスチック製のペトリ皿に5グラムの新鮮な肉または腐った肉を入れて準備します。基質は幼虫試験と同じで、新鮮で生後5日で腐っています。
各十字架には合計4つのペトリ皿が必要で、2つは新鮮な肉で、2つは腐った肉で。新鮮な肉には、抗凝固剤で血液の半分と水の半分である1ミリメートルの希釈した牛の血液を加えます。腐った肉には、ろ過した水を1ミリ加えます。
腐った肉と新鮮な肉の間の臭いの相互汚染を避けるために、両方の基質をよくかき混ぜ、異なるスプーンを使用することを忘れないでください。十字架の上でアルコールが完全に蒸発していないか確認してください。次に、十字架の腕の先端に肉の入ったシャーレを4つ置き、各種類の肉を1つずつ加熱パッドに置き、残りの2つを加熱パッドの表面の外側に置きます。
これにより、十字架のそれぞれに、新鮮で冷たい、腐ったと冷たい、新鮮で暑い、そして最後に腐って暑いという4つの基質を持つことができます。十字架の開口部を閉じ、基板を約10分間加熱します。ステップ3、女性テスト。
ハエのケージでメスを集めます。腹部が肥大して白っぽい黄色をしているのが特徴です。個々のチューブのクロスごとに1つのメスを分離します。
赤外線温度計で基板の温度を確認します。寒いほうは25°Cくらい、暑いほうは33°Cくらいです。各クロスの中央の開口部に、つかんだ女性が入ったチューブを1本置きます。
女性が十字架に入った後、蓋で開口部を閉めます。すべての女性を各十字架に配置した後、棚の開いた部分を黒い段ボールで閉じて、外部光源から保護します。実験をちょうど 4 時間実行します。
この時間が終了したら、チューブを使用してクロスから女性を取り外します。次に、基板上に他の位置があるかどうかを確認します。各ペトリ皿の蓋を基板の名前で識別します。
70%エタノールを使用して、テストからの臭いから十字架をきれいにします。ステップ4、卵の数。ペトリ皿は、カウントする前に冷凍することができます。
この場合、ペトリ皿を解凍します。次に、実体顕微鏡を使用して各基質中の卵の数をカウントします。データ分析と統計。
ステップ1、選好指数の計算。行動テストの反復ごとに、基質の種類と温度について個別に選好指数が計算されます。基質タイプの選好指数は、新鮮な肉の基質上の幼虫または卵の数を、すべての基質上の幼虫または卵の総数で割った値で表されます。
温度の選好指数は、高温の基質上の幼虫または卵の数を、すべての基質上の幼虫または卵の総数で割った値で表されます。両方のインデックスの選好を考慮すると、1に近い値は、新鮮な基質または高温の基質の選好を反映しています。また、ゼロに近い値は、腐った基板や冷たい基板を好むことを意味します。
ステップ2では、観察された選好とランダムな選択を比較します。Y軸には温度の嗜好指数、X軸には肉の嗜好指数を可視化できます。幼虫や雌がある条件を好むかどうかを判断するために、シミュレーションデータを使用して結果を無作為の選択と比較しました。
私たちの幼虫の結果は、温度と肉の好みの点で、すべてのシミュレーションデータセットから大幅に遅れていました。図式的には、幼虫が腐った冷たい基質を強く選好していたことは明らかです。その結果、肉の種類に対する女性の好みは、比較の約30%で無作為の選択と有意に異なっていることがわかった。
温度については、比較の約70%が有意な選好をもたらしました。どちらのプロトコルも、肉の種類と温度という2つの相互作用要因について、幼虫と雌の好みをテストする可能性を提供します。テストは簡単で、同じサイズや他の条件の他の種の好みをテストするために適応させることができます。
動物の行動は非常に多様であり、いくつかの環境要因の影響を受けることがわかっているため、不均等な照明、長引く臭い、および共有器具を介したその他の基質の汚染を避けるために特別な注意を払う必要があります。ご覧いただきありがとうございます。
