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요약

이 연구는 에스케리치아 콜라이 (E. coli )에서 세포 추출물을 제조한 후 24 시간 이내에 무세포 단백질 합성 (CFPS) 반응을 설명합니다. 무세포 자동 유도 (CFAI) 프로토콜에 대한 설명은 연구자의 감독을 줄이고 얻은 세포 추출물의 양을 늘리기 위해 개선 된 내용을 자세히 설명합니다.

초록

무세포 단백질 합성(CFPS)은 시험관 내에서 전사 및 번역 기계를 포획하는 생명공학 플랫폼으로 성장했습니다. 수많은 개발로 인해 CFPS 플랫폼은 새로운 사용자가 더 쉽게 액세스 할 수있게되었으며 응용 프로그램의 범위를 확장했습니다. 용해물 기반 CFPS 시스템의 경우, 세포 추출물은 다양한 유기체로부터 생성될 수 있으며, 단백질 합성을 증강시키기 위해 숙주의 독특한 생화학을 이용한다. 지난 20 년 동안 대장균 (E. coli) 은 경제성과 다양성으로 인해 CFPS를 지원하는 데 가장 널리 사용되는 유기체 중 하나가되었습니다. 수많은 주요 발전에도 불구하고, 대장균 세포 추출물 제조를 위한 워크플로우는 신규 사용자가 자신의 애플리케이션에 CFPS를 구현하는 데 있어 중요한 병목 현상으로 남아 있습니다. 추출물 준비 작업 과정은 시간이 많이 걸리며 재현 가능한 결과를 얻기 위해 기술적 전문 지식이 필요합니다. 이러한 장벽을 극복하기 위해 우리는 이전에 사용자 입력 및 필요한 기술 전문 지식을 줄이는 24 시간 무세포 자동 유도 (CFAI) 워크 플로의 개발을보고했습니다. CFAI 워크플로우는 세포 추출물을 생성하는 데 필요한 노동력과 기술 기술을 최소화하는 동시에 획득한 세포 추출물의 총 양을 증가시킵니다. 여기에서는 접근성을 향상시키고 대장균 기반 CFPS의 광범위한 구현을 지원하기 위해 단계별로 워크 플로우를 설명합니다.

서문

생명 공학 응용 분야를위한 무세포 단백질 합성 (CFPS)의 사용은 지난 몇 년 동안 1,2,3 년 동안 크게 증가했습니다. 이러한 개발은 부분적으로 CFPS에서 발생하는 프로세스와 각 구성 요소 4,5의 역할을 이해하려는 노력이 증가했기 때문일 수 있습니다. 또한 최적화 된 설정 및 대체 에너지 원으로 인한 비용 절감으로 인해 새로운 사용자 6,7,8,9를 위해 무세포 기술을 쉽게 구현할 수있었습니다. 단백질 합성에 필요한 전사 및 번역 인자를 구현하기 위해, 세포 추출물은 종종 무세포 반응(10)을 구동하는데 사용된다. 최근 출판 된 사용자 가이드는 기능 추출을 생성하기위한 간단한 프로토콜을 제공하여 신규 및 숙련 된 사용자 모두에게 구현하기가 더 쉬워졌습니다1,11,12,13,14. 세포 추출물은 일반적으로 세포 배양물의 용해를 통해 얻어지며, 이는 원하는 특정 용도1,15,16에 따라 다른 유기체를 사용하여 성장할 수 있다.

대장균(E. coli)은 기능성 추출물(17)을 생산하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 숙주 유기체 중 하나가 되었다. 상기 BL21 스타(DE3) 균주는 외막으로부터 프로테아제(OmpT 프로테아제) 및 세포질(Lon protease)을 제거하여, 재조합 단백질 발현을 위한 최적의 환경을 제공하기 때문에 바람직하다. 추가적으로, DE3은 lacUV5 프로모터의 제어 하에 T7 RNA 폴리머라제 (T7 RNAP)에 대한 유전자를 운반하는 λDE3을 함유하고; 스타 성분은 mRNA4,14,18,19의 절단을 방지하는 돌연변이된 RNaseE 유전자를 함유한다. lacUV5 프로모터 하에서, 이소프로필티오갈락토피라노시드 (IPTG) 유도는 T7 RNAP20,21의 발현을 허용한다. 이 균주는 세포를 재배하고 수확하는 데 사용되며, 이는 추출물 준비를위한 원료를 제공합니다. 세포 용해는 비드 박동, 프렌치 프레스, 균질화, 초음파 처리 및 질소 캐비테이션1,11,12,22를 포함한 다양한 방법을 사용하여 수행 할 수 있습니다.

박테리아 배양 및 수확 과정은 대장균을 사용할 때 대부분의 플랫폼에서 일관되지만 며칠이 걸리고 강렬한 연구자 감독1,11,13이 필요합니다. 이 과정은 일반적으로 LB 국물에서 하룻밤 종자 배양으로 시작되며, 이는 밤새 성장시 다음날 2xYTPG (효모, 트립톤, 인산염 완충액, 포도당)의 더 큰 배양물에 접종된다. 이러한 더 큰 배양물의 성장은 2.514,20의 광학 밀도 (OD)에서 초기 내지 중간 로그 단계에 도달할 때까지 모니터링된다. 전사 및 번역의 구성 요소가 이전에 초기 내지 중간 로그 단계23,24에서 고도로 활성인 것으로 입증되었기 때문에 지속적인 측정이 요구된다. 이 과정이 재현 가능한 추출물을 만들 수 있지만, 우리 연구실은 최근 연구원의 감독을 줄이고 주어진 1 리터의 세포 배양에 대한 추출물의 전반적인 수율을 높이며 숙련 된 사용자와 신규 사용자 모두를위한 대장균 기반 추출물 제제에 대한 액세스를 향상시키는 무세포 자동 유도 (CFAI) Media를 사용하는 새로운 방법을 개발했습니다 (그림 1 ). 여기서 우리는 CFAI 워크플로우를 구현하기 위한 단계별 가이드를 제공하며, 줄무늬가 있는 세포 플레이트에서 24시간 이내에 완료된 CFPS 반응으로 이동합니다.

프로토콜

1. 미디어 성장

  1. 표 1에 기재된 바와 같이 CFAI 배지 960 mL를 제조하고 KOH를 사용하여 pH를 7.2로 조정하였다.
  2. 배양 배지를 2.5 L 배플 플라스크에 옮기고 121°C에서 30분 동안 오토클레이브한다.
  3. 표 1에 기재된 바와 같이 당 용액 40 mL를 제조하였다. 용액을 별도의 오토클레이브 유리 용기에 여과 멸균하십시오.
    참고: 설탕 용액은 추가 사용 시까지 30°C 인큐베이터에 보관할 수 있습니다.
  4. 오토클레이빙 후 매체를 40°C 이하로 완전히 냉각시키십시오.
  5. CFAI 배지를 접종하기 전에 설탕 용액을 CFAI 배지에 직접 첨가하십시오.
  6. 배지를 접종하기 위해, 이전에 줄무늬가 있는 대장균 BL21 스타(DE3) 플레이트로부터 루프풀한 콜로니를 스와이프하고 배지에 직접 삽입한다. 루프를 미디어에 소용돌이 치지 만 컨테이너의 측면을 만지지 마십시오. 줄무늬 플레이트가 생존 가능한 세포와 함께 신선한지 확인하십시오.
  7. 접종된 배지가 있는 플라스크를 30°C 인큐베이터에 놓고 200 rpm으로 진탕시킨다. 문화가 하룻밤 사이에 자라도록 허용하십시오. 세포가 저녁에 접종되는 경우, 배양물은 다음 날 아침 10의 600 nm (OD600)에서 측정된 대략적인 광학 밀도에 도달할 것이다. 접종 및 수확 시간은 필요에 따라 조정할 수 있습니다.

2. 세포 수확

  1. S30 버퍼를 미리 준비하고 차갑게 유지하십시오. 표 2에 따라 S30 버퍼를 준비하고, 최종 pH를 8.2로 하였다.
    참고: S30 버퍼는 셀 수확 며칠 전에 준비할 수 있습니다. 이것이 완료되면, 디티오트레이톨 없이 준비하고 4°C에서 보관한다. 사용 직전에 디티오트레이톨을 첨가하십시오.
  2. 이 시점부터 모든 솔루션과 재료를 얼음 위에 보관하십시오. 1 L의 배지를 1 L 원심분리 병에 옮기고 4-10°C 사이에서 5,000 x g 에서 10분 동안 원심분리한다. 상청액을 데칸트하고 폐기하십시오. 멸균 주걱을 사용하여, 펠릿을 미리 냉각되고 이전에 칭량된 50 mL 코니컬 튜브로 옮긴다.
  3. 차가운 S30 버퍼 30-40 mL로 한 번 세척하여 얼음 위에서 휴식 기간과 함께 30 초 파열로 볼텍싱을 통해 펠렛을 재현탁하십시오.
    참고: 펠릿의 부피가 많기 때문에 세포 펠릿을 두 개의 50mL 원뿔형 튜브로 분할하면 세척 단계에 도움이 될 수 있습니다. 더 작은 분취량에 세포를 저장하는 것은 또한 다운스트림 처리를 위한 유연성을 제공한다.
  4. 세포를 5000 x g 에서 4-10°C 사이에서 10분 동안 재현탁시키는 원심분리기.
  5. 상청액을 폐기하고 깨끗한 조직을 사용하여 50 mL 원뿔형 튜브의 내벽에서 과량의 물을 닦아내고 펠릿 자체를 만지지 않도록하십시오. 무게를 재고 플래쉬하면 펠렛을 액체 질소에서 동결시킵니다. 추가 사용 시까지 -80°C에서 보관하십시오.
    참고: 사용자가 추출 준비 프로토콜을 계속할 계획인 경우 펠렛은 플래시 동결이 필요하지 않을 수 있습니다.

3. 추출물 제조

  1. 동결된 펠렛을 세포 펠릿 1g당 1mL의 S30 버퍼와 결합하고 약 30-60분 동안 얼음 위에서 해동되도록 한다. 볼텍싱을 통해 해동된 펠릿을 얼음 위에서 휴식 기간과 함께 30초의 버스트로 재현탁하십시오. 눈에 보이는 세포 덩어리가 남지 않을 때까지 소용돌이.
    참고: 더 작은 덩어리는 피펫을 사용하여 혼합하여 재현탁할 수 있습니다.
  2. 세포 용해를 위해 1.4 mL의 세포 재현탁물의 분취량을 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브 내로 옮긴다. 20kHz의 주파수와 50% 진폭의 각 튜브를 초음파 처리하여 45초의 세 번의 버스트를 처리하고 사이클당 59초의 휴식 시간을 얼음 욕조로 둘러싸고 있습니다. 사이클 사이에 튜브를 반전시키고 마지막 초음파 처리 사이클 후에 즉시 4.5 μL의 1 M 디티오트레이톨을 첨가하십시오.
    참고 : 초음파 처리에서 방출되는 열로 인해 초음파 처리되지 않을 때 모든 분취량을 얼음 위에 보관하는 것이 매우 중요합니다. 얼음 욕조는 지속적으로 보충되거나 전체 초음파 처리 과정에서 시원하게 유지되기에 충분히 커야합니다.
  3. 각 튜브를 18,000 x g 및 4°C에서 10분 동안 원심분리한다. 상청액 및 분취량을 600 μL 분취량의 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브 내로 회수한다. 플래시 동결 분취량을 추가 사용 때까지 -80°C에서 보관한다. 상층액 만 피펫에주의해야합니다.

4. 무세포 단백질 합성

  1. 이전 단계로부터의 추출물의 1분취량을 해동하여 1.5 mL 마이크로퍼지 튜브에서 무세포 단백질 합성 반응의 15 μL를 사분면으로 수행한다.
  2. 240 ng의 DNA (16 μg/mL 최종 농도), 2.20 μL의 용액 A, 2.10 μL의 용액 B, 5.0 μL의 추출물 및 다양한 부피의 분자 등급 물을 결합하여 각 반응을 준비하여 15 μL로 반응물을 채운다. 이 반응은 더 높은 부피로 스케일링될 수 있다. 비율에 대해서는 표 3 을 참조한다.
    1. 표 4에 따라 용액 A 및 B를 준비한다. 각 용액은 100 μL 내지 1 mL의 배치로 제조되고, 분취될 수 있고, 추가 사용 시까지 -80°C에서 저장될 수 있다.
      참고: DNA 양은 관심있는 단백질에 따라 달라질 수 있습니다. 이 경우, 사용된 플라스미드인 pJL1-sfGFP는 16μg/mL 또는 597μM에서 수행하도록 최적화되었습니다.
  3. 반응을 37°C에서 적어도 4시간 동안 실행시킨다.

5. 리포터 단백질, 슈퍼 폴더 녹색 형광 단백질 (sfGFP)의 정량

  1. 절반 면적 96-웰 검정 폴리스티렌 플레이트를 사용하여, 2 μL의 각 무세포 단백질 합성 반응 생성물을 pH 7.2에서 0.05 M HEPES 완충액 48 μL와 결합한다. 각 반응 튜브의 서너 번의 반복실험이 권장됩니다.
  2. 485nm의 여기 파장과 528nm의 방출 파장으로 sfGFP의 형광 강도를 정량화합니다.
  3. 상대 형광 단위를 sfGFP의 부피 수율(μg/mL)로 전환하려면 정제된 pJL1-sfGFP를 사용하여 표준 곡선을 수립하십시오.

결과

CFAI 배지를 제조할 때, 글루코스는 배지 내의 주요 에너지 기질로서 락토오스 및 글리세롤의 증가를 위해 교환되었다. 또한 CFAI 매체의 버퍼링 용량도 증가했습니다. 이들 특정 성분은 표 1에 제시되어 있다.

이어서, 세포를 CFAI 배지에서OD600 10 및 표준 2.5 둘 다로 성장시켜 다양한 추출물 양에도 불구하고 추출물 품질과의 일관성을 보여주었다. 상기 2.5 OD60...

토론

연구원의 감독은 전통적으로 세포 성장 동안 두 가지 주요 작용, 즉 T7 RNAP의 유도와 특정OD600에서 세포를 수확하는 데 필요합니다. CFAI는 고품질의 세포 추출물을 제조하기 위해 필요한 연구자의 시간과 기술 교육을 줄이기 위해 이러한 요구 사항을 모두 제거합니다. T7 RNAP의 자동 유도는 배지 내의 일차 당으로서 글루코스를 락토오스로 대체함으로써, 세포 성장 동안 정확한 지점에서 IPTG?...

공개

저자들은 경쟁적인 재정적 이해 상충이 없다고 선언합니다.

감사의 말

저자는 Jennifer VanderKelen 박사와 Andrea Laubscher가 기술 지원을 받고 있음을 인정하고 싶습니다. 저자는 또한 니콜 그레고리오, 맥스 레빈, 알리사 멀린, 병철 소, 어거스트 브룩웰, 엘리자베스 (리지) 보이보다, 로건 버링턴, 질리언 카스만에게 도움이 된 토론에 감사드립니다. 저자는 또한 빌 앤 린다 프로스트 펀드, 생명 공학의 셰브론 생명 공학 응용 연구 기부 보조금 센터, 칼 폴리 연구, 학술 및 국립 과학 재단 (NSF-1708919)의 자금 지원을 인정합니다.

자료

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL Microfuge TubesPhenixMPC-425Q
1L Centrifuge TubeBeckman CoulterA99028
Avanti J-E CentrifugeBeckman Coulter369001
CoASigma-AldrichC3144-25MG
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode ReaderBiotekBTCYT5F
D-GlucoseFisherD16-3
D-LactoseAlfa AesarJ66376
DTTThermoFisher15508013
Folinic AcidSigma-AldrichF7878-100MG
GlycerolFisherBP229-1
GlycineSigma-AldrichG7126-100G
HEPESThermoFisher11344041
IPTGSigma-AldrichI6758-1G
JLA-8.1000 RotorBeckman Coulter366754
K(Glu)Sigma-AldrichG1501-500G
K(OAc)Sigma-AldrichP1190-1KG
KOHSigma-AldrichP5958-500G
L-AlanineSigma-AldrichA7627-100G
L-ArginineSigma-AldrichA8094-25G
L-AsparagineSigma-AldrichA0884-25G
L-Aspartic AcidSigma-AldrichA7219-100G
L-CysteineSigma-AldrichC7352-25G
L-Glutamic AcidSigma-AldrichG1501-500G
L-GlutamineSigma-AldrichG3126-250G
L-HistadineSigma-AldrichH8000-25G
L-IsoleucineSigma-AldrichI2752-25G
L-LeucineSigma-AldrichL8000-25G
L-LysineSigma-AldrichL5501-25G
L-MethionineSigma-AldrichM9625-25G
L-PhenylalanineSigma-AldrichP2126-100G
L-ProlineSigma-AldrichP0380-100G
L-SerineSigma-AldrichS4500-100G
L-ThreonineSigma-AldrichT8625-25G
L-TryptophanSigma-AldrichT0254-25G
L-TyrosineSigma-AldrichT3754-100G
Luria BrothThermoFisher12795027
L-ValineSigma-AldrichV0500-25G
Mg(Glu)2Sigma-Aldrich49605-250G
Mg(OAc)2Sigma-AldrichM5661-250G
Microfuge 20Beckman CoulterB30134
Molecular Grade WaterSigma-Aldrich7732-18-5
NaClAlfa AesarA12313
NADSigma-AldrichN8535-15VL
New Brunswick Innova 42/42R IncubatorEppendorfM1335-0000
NH4(Glu)Sigma-Aldrich09689-250G
NTPsThermoFisherR0481
Oxalic AcidSigma-AldrichP0963-100G
PEPSigma-Aldrich860077-250MG
Potassium Phosphate DibasicAcros, OrganicsA0382124
Potassium Phosphate MonobasicAcros, OrganicsA0379904
PureLink HiPure Plasmid Prep KitThermoFisherK210007
PutrescineSigma-AldrichD13208-25G
SpermidineSigma-AldrichS0266-5G
Tris(OAc)Sigma-AldrichT6066-500G
tRNASigma-Aldrich10109541001
TryptoneFisher Bioreagents73049-73-7
Tunair 2.5L Baffled Shake FlaskSigma-AldrichZ710822
Ultrasonic ProcessorQSonicaQ125-230V/50HZ
Yeast ExtractFisher Bioreagents1/2/8013

참고문헌

  1. Gregorio, N. E., Levine, M. Z., Oza, J. P. A user's guide to cell-free protein synthesis. Methods and Protocols. 2 (1), 1-34 (2019).
  2. Silverman, A. D., Karim, A. S., Jewett, M. C. Cell-free gene expression: an expanded repertoire of applications. Nature Reviews Genetics. 21 (3), (2020).
  3. Swartz, J. R. Expanding biological applications using cell-free metabolic engineering: An overview. Metabolic Engineering. 50, 156-172 (2018).
  4. Jared, B., Dopp, L., Tamiev, D. D., Reuel, N. F. Cell-free supplement mixtures: Elucidating the history and biochemical utility of additives used to support in vitro protein synthesis in E. coli extract. Biotechnology Advances. 37 (1), 246-258 (2019).
  5. Jewett, M. C., Swartz, J. R. Mimicking the Escherichia coli cytoplasmic environment activates long-lived and efficient cell-free protein synthesis. Biotechnology and Bioengineering. 86 (1), 19-26 (2004).
  6. Calhoun, K. A., Swartz, J. R. Energizing cell-free protein synthesis with glucose metabolism. Biotechnology and Bioengineering. 90 (5), 606-613 (2005).
  7. Levine, M. Z., Gregorio, N. E., Jewett, M. C., Watts, K. R., Oza, J. P. Escherichia coli-based cell-free protein synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology. Journal of Visualized Experiments. (144), e58882 (2019).
  8. Sun, Z. Z., et al. Protocols for Implementing an Escherichia coli Based TX-TL Cell-Free Expression. System for Synthetic Biology. , 1-14 (2013).
  9. Pardee, K., et al. Portable, on-demand biomolecular manufacturing. Cell. 167, 248-254 (2016).
  10. Moore, S. J., Macdonald, J. T., Freemont, P. S. Cell-free synthetic biology for in vitro prototype engineering. Biochemical Society Transactions. 45 (3), 785-791 (2017).
  11. Cole, S. D., Miklos, A. E., Chiao, A. C., Sun, Z. Z., Lux, M. W. Methodologies for preparation of prokaryotic extracts for cell-free expression systems. Synthetic and Systems Biotechnology. 5 (4), 252-267 (2020).
  12. Didovyk, A., Tonooka, T., Tsimring, L., Hasty, J. Rapid and scalable preparation of bacterial lysates for cell-free gene expression. ACS Synthetic Biology. 6 (12), 2198-2208 (2017).
  13. Dopp, J. L., Reuel, N. F. Process optimization for scalable E. coli extract preparation for cell-free protein synthesis. Biochemical Engineering Journal. 138, 21-28 (2018).
  14. Kwon, Y. C., Jewett, M. C. High-throughput preparation methods of crude extract for robust cell-free protein synthesis. Scientific Reports. 5, 8663 (2015).
  15. Endo, Y., Sawasaki, T. Cell-free expression systems for eukaryotic protein production. Current Opinion in Biotechnology. 17 (4), 373-380 (2006).
  16. Zemella, A., Thoring, L., Hoffmeister, C., Kubick, S. Cell-free protein synthesis: Pros and cons of prokaryotic and eukaryotic systems. ChemBioChem. 16 (17), 2420-2431 (2015).
  17. Laohakunakorn, N., Grasemann, L., Lavickova, B., Michielin, G. Bottom-up construction of complex biomolecular systems with cell-free synthetic biology. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
  18. Ahn, J. H., et al. Cell-free synthesis of recombinant proteins from PCR-amplified genes at a comparable productivity to that of plasmid-based reactions. Biochemical and Biophysical Research Communications. 338 (3), 1346-1352 (2005).
  19. Kim, T. W., et al. Simple procedures for the construction of a robust and cost-effective cell-free protein synthesis system. Journal of Biotechnology. 126 (4), 554-561 (2006).
  20. Hunt, J. P., et al. Streamlining the preparation of "endotoxin-free" ClearColi cell extract with autoinduction media for cell-free protein synthesis of the therapeutic protein crisantaspase. Synthetic and Systems Biotechnology. 4 (4), 220-224 (2019).
  21. Studier, F. W. Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein Expression and Purification. 41, 207-234 (2005).
  22. Shrestha, P., Holland, T. M., Bundy, B. C. Streamlined extract preparation for Escherichia coli-based cell-free protein synthesis by sonication or bead vortex mixing. BioTechniques. 53 (3), 163-174 (2012).
  23. Bosdriesz, E., Molenaar, D., Teusink, B., Bruggeman, F. J. How fast-growing bacteria robustly tune their ribosome concentration to approximate growth-rate maximization. FEBS Journal. 282 (10), 2029-2044 (2015).
  24. Zawada, J., Swartz, J. Maintaining rapid growth in moderate-density Escherichia coli fermentations. Biotechnology and Bioengineering. 89 (4), 407-415 (2005).
  25. Kim, J., Copeland, C. E., Padumane, S. R., Kwon, Y. C. A crude extract preparation and optimization from a genomically engineered Escherichia coli for the cell-free protein synthesis system: Practical laboratory guideline. Methods and Protocols. 2 (3), 1-15 (2019).
  26. Failmezger, J., Rauter, M., Nitschel, R., Kraml, M., Siemann-Herzberg, M. Cell-free protein synthesis from non-growing, stressed Escherichia coli. Scientific Reports. 7 (1), 1-10 (2017).
  27. Levine, M. Z., et al. Activation of energy metabolism through growth media reformulation enables a 24-h workflow for cell-free expression. ACS Synthetic Biology. 9 (10), 2765-2774 (2020).
  28. Martin, R. W., et al. Cell-free protein synthesis from genomically recoded bacteria enables multisite incorporation of noncanonical amino acids. Nature Communications. , 1-9 (2018).
  29. Soye, B. J. D., et al. Resource A highly productive, One-pot cell-free protein synthesis platform based on genomically recoded Escherichia coli resource. Cell Chemical Biology. 26 (12), 1743-1754 (2019).
  30. Ezure, T., Suzuki, T., Ando, E. A cell-free protein synthesis system from insect cells. Methods in Molecular Biology. , 285-296 (2014).
  31. Heide, C., et al. development and optimization of a functional mammalian cell-free protein synthesis platform. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, 1-10 (2021).

Erratum


Formal Correction: Erratum: From Cells to Cell-Free Protein Synthesis within 24 Hours using Cell-Free Autoinduction Workflow
Posted by JoVE Editors on 5/23/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: From Cells to Cell-Free Protein Synthesis within 24 Hours using Cell-Free Autoinduction Workflow. The Authors section was updated.

The Authors section was updated from:

Philip E.J. Smith1,2, Taylor Slouka1,2, Javin P. Oza1,2
1Department of Chemistry and Biochemistry, California Polytechnic State University
2Center for Application in Biotechnology, California Polytechnic State University

to:

Philip E.J. Smith1,2, Taylor Slouka1,2, Mona Dabbas 1,2, Javin P. Oza1,2
1Department of Chemistry and Biochemistry, California Polytechnic State University
2Center for Application in Biotechnology, California Polytechnic State University

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