쥐 모델에서 우수한 자궁경부 신경절 절제술을 위한 수술 기법

요약

본 프로토콜은 상부 경추 신경절을 식별하고 절제함으로써 아드레날린성 신경 분포를 절제하는 마우스 모델을 설명합니다.

초록

교감 신경계가 암 진행에 중요한 역할을 한다는 증거가 늘어나고 있습니다. 아드레날린성 신경 분포는 침샘 분비, 일주기 리듬, 황반 변성, 면역 기능 및 심장 생리학을 조절합니다. 쥐 외과적 교감신경 절제술은 반복적인 약리학적 개입 및 관련 부작용의 필요성을 피하면서 완전하고 일방적인 아드레날린 절제를 허용함으로써 아드레날린 신경 분포의 효과를 연구하는 방법입니다. 그러나 생쥐의 외과적 교감신경 절제술은 상부 경추 신경절의 크기가 작기 때문에 기술적으로 어렵습니다. 본 연구는 상부 경추 신경절을 확실하게 식별하고 절제하여 교감신경계를 절제하는 수술 기법을 기술한다. 신경절의 성공적인 식별 및 제거는 형질전환 마우스를 사용하여 형광 교감신경절을 영상화하고, 절제 후 호너 증후군을 식별하고, 절제된 신경절에서 아드레날린 마커를 염색하고, 교감신경 절제술 후 표적 기관에서 감소된 아드레날린 면역형광을 관찰함으로써 검증됩니다. 이 모델은 암 진행뿐만 아니라 교감 신경계에 의해 조절되는 다른 생리적 과정에 대한 향후 연구를 가능하게 합니다.

서문

여러 연구에서 종양 미세 환경의 신경이 종양 진행을 지원하는 데 적극적인 역할을 한다고 보고했습니다. 아드레날린성 교감신경의 절제는 생체 내에서 전립선암과 위암의 종양 발달 및 파종을 저해하는 것으로 나타났으며^1,2,3, 아드레날린성 수용체의 약리학적 차단은 두경부암의 종양 성장을 억제한다 ⁴. 교감신경 침범은 또한 췌장암, 자궁경부암 및 기저 세포 암종 진행에서 설명되었습니다 ^5,6,7.

교감 신경계 내에서 상부 경추 신경절(SCG)은 머리를 자극하는 교감신경 줄기의 유일한 신경절입니다. SCG는 타액 분비 및 일주기 리듬과 같은 다양한 생리적 기능을 조절하고 자궁 경부 림프절을 직접 자극합니다 ^8,9,10.

프로토콜

여기에 설명된 동물 절차는 메모리얼 슬론 케터링 암 센터(Memorial Sloan Kettering Cancer Center)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 8주령의 수컷 및 암컷 NSG 마우스를 여기에 사용하였다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 기구는 멸균되고, 수술 작업 표면은 소독되고, 동물의 피부 표면은 소독되며, 외과 의사는 수술 내내 멸균 장갑을 착용합니다.

1. 마우스의 준비 및 수술 전 설정

1. 수술 전날, 유도 챔버(폭 3.75 x 깊이 9 x 높이 3.75, 재료 표 참조)에서 2% 이소플루란으로 마우스를 마취합니다.
   참고: 마취 수술면은 일반적으로 개별 동물에 따라 3-5분 내에 이루어집니다. 발가락 꼬집음으로 마취의 적절성을 평가하고 이소플루란 비율을 적절하게 높입니다.
   1. 목의 복부 측면을 면도하거나 제조업체의 지침에 따라 화학 제모제를 사용하십시오 ( 재료 표 참조).
2. 수술 당일, 유도 챔버에....

결과

이 프로토콜은 마우스 모델에서 SCG의 외과적 제거를 설명합니다. 그림 2 는 CCA, 전경정맥 및 SCG를 포함한 해부학적 랜드마크를 보여줍니다. 해부(그림 2A)를 통해 우측 전방 경정맥이 기관의 측면 경계를 따라 흐르는 것을 볼 수 있습니다. 전경정맥보다 더 깊숙이 위치하기 때문에 왼쪽 CCA와 내경동맥(ICA)과 외경동맥(ECA)으로의 분기점은 정맥 측면에서만.......

토론

이 프로토콜은 SCG 입력의 외과적 편측 절제를 위한 마우스 모델을 설명합니다. 이 기술을 사용하면 다양한 환경에서 아드레날린 성 신경 분포의 효과를 연구 할 수 있습니다. 또한, 절제된 교감신경 신경절은 시험관내 실험(in vitro experiments)을 위한 3D 매트리겔 배양(^3D matrigel culture)에서도 성장할 수 있다 30.

SCGx와 관련된 연구는 해부학적 구조가 더 커?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody	EMD Millipore	AB152
Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment	Akorn	59399-162-35
Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile	Covidien	1806
Derf Needle Holder	Thomas Scientific	1177K00
Dissecting Microscope
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35
Dumont #7b Forceps	Fine Science Tools	11270-20
ETHILON Nylon Suture	Ethicon	698H
Fine Scissors - ToughCut	Fine Science Tools	14058-09
Hypoallergenic Surgical Tape	3M Blenderm	70200419342
Induction Chamber, 2 Liter	VetEquip	941444
Isoflurane	Baxter	1001936060
Nair	Church & Dwight Co., Inc	40002957	chemical hair removing agent
NORADRENALINE RESEARCH ELISA	Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics)	BA E-5200
NSG Mouse	Jackson Laboratory	JAX:005557
Povidone-Iodine Swabstick	PDI	S41350
Webcol Alcohol Preps	Covidien	5110