뇌성마비가 있는 쥐의 운동 기능 장애를 개선하기 위한 복부 마사지

요약

여기에서는 뇌성마비 쥐의 운동 기능을 상당히 향상시킬 수 있는 뇌성마비 쥐 모델에서 일련의 마사지 조작을 제시합니다.

초록

뇌성마비(CP)는 장애율과 이환율이 높은 질병입니다. 뇌성마비의 임상 증상은 운동 기능 장애와 비정상적인 자세 발달이며, 종종 인지 장애를 동반합니다. 중국 전통 의학 요법인 마사지는 장과 푸를 조정하고, 기와 혈액을 조절하고, 내장을 더 원활하게 작동시키고, 음과 양을 진정시킬 수 있습니다. 또한, 임상에서 CP에 효과적인 방법이었습니다. 이 논문은 따라하기 쉬운 CP가 있는 어린 쥐를 위한 마사지의 간단하고 표준화된 조작 세트를 요약합니다. 절차는 다음과 같습니다 : 먼저 Quchi (LI11) 및 Zusanli (ST36)를 포함한 4 개의 사지 경혈 마사지; 둘째, 복부 경혈 Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) 및 Qihai (CV6) 마사지; 그리고 마지막으로 쥐의 복부 마사지. 이 일련의 마사지 방법은 뇌성마비를 가진 어린 쥐의 운동 기능을 상당히 향상시켰으며 간단하고 표준화되어 있으며 따라하기 쉽습니다. 우리는 마사지의 국제화와 표준화를 촉진하기 위해 동물 모델에서 이러한 일련의 조작 방법을 적용했습니다.

서문

뇌성마비(CP)는 장애율과 이환율이 높은 질병입니다. 뇌성마비에 대한 역학조사에 따르면 영아 1,000명당 3-5명의 영아가 뇌성마비를 앓고 있다¹. 뇌성마비의 전형적인 증상으로는 지속적인 중추운동 및 자세발달장애², 감각활동제한³, 지각, 인지4^{, 의사소통}5, 행동장애, 간^{질, 이}차성 근골격계 문제¹ 등이 있다. 아직까지 평생 장애를 일으키는 이 질병에 대한 치료법은 없습니다. 현재의 치료법으로는 운동요법⁶, 수치료⁷, 기능적 전기자극술⁸, 근육외골격요법⁹, 제대혈세포요법¹⁰, 보툴리눔 독소 주사, 수술¹¹ 등이 있다. 그러나 임상적 재활은 시간이 오래 걸리고 많은 에너지를 소모하며, 재활은 환자의 적극적인 협조가 필요하기 때문에 동물모델에서 복제하기 어렵다. 수술에는 한계, 적응증 및 비가역성이 있습니다. 경구용 약물은 뇌성마비 아동의 운동 기능 치료에 효과가 낮다¹². 근육 외골격 치료와 제대혈 치료는 경제적 비용이 많이 들고 경제적으로 부담하기 어렵기 때문에 적절한 치료 전략을 찾는 것이 중요합니다.

마사지는 비침습적이고, 부작용이 없으며, 어린이를 위한 매우 인정받고 비용 효율적인 치료 방법입니다. 임상¹³ 및 동물 실험¹⁴ 모두에서 뇌성마비의 기능 장애를 개선하는 것으로 입증되었다. 중국 전통 의학에서는 마사지가 장기를 조절하고 경락을 막아 뇌성마비 기능 장애를 개선할 수 있다고 믿는다¹⁵. 효과적인 한의학 치료 방법으로서 마사지는 그 작용 기전을 설명하여 세상에 알리기 위해서는 현대 의학 연구 방법이 필요합니다. 그러나 뇌성마비 소아의 관련 기전을 연구하는 데에는 객관적인 연구의 한계와 윤리적 한계가 있다. 따라서 동물의 CP를 개선하기 위한 관련 마사지 메커니즘을 연구하는 것이 더 편리합니다. 동물은 어린이와 다르지만 동물에 대한 마사지의 효과를 조사하려면 TCM의 기본 이론을 고수해야 합니다. 임상 및 실험 동물학의 관점에서 우리는 마사지의 효과를 연구하기 위해 인체에서 동물의 몸으로 이 기술을 복제하여 마사지 요법의 적용을 촉진하는 데 도움이 될 것입니다.

첫째, 중국 전통 의학에서는 뇌성마비가 "다섯 가지 지각"과 "다섯 가지 부드러움"의 증상에 속한다고 믿습니다.¹⁶ 뇌성마비의 원인은 선천성 태아 기능 장애, 간 및 신장 결핍, 에센스와 기의 부족, 후천성 영양 결핍^{등이다 15}. 신장은 인체 장기와 조직의 성장, 발달 또는 재생 및 복구를 지배하며, 이러한 물질은 신체의 성장, 발달, 조직 복구 및 부활에 매우 중요합니다. 신장의 필수 기는 성장과 발달의 기초입니다. 신장 에센스가 부족하면 골수 부전, 기와 혈액 장애, 신체 내부 장기, 근육 및 뼈의 영양 부족으로 이어질 수 있습니다. 뇌성마비가 있는 어린이는 성장과 발달이 지연되고, 팔다리의 관절 가동성이 감소하며, 근육 긴장이 증가하기 쉽습니다. 또한 장기간의 질병은 과도한 결핍과 혈액 정체로 이어져 경락 폐쇄를 유발하여 지적 장애, 느린 반응, 운동 장애, 언어 모호성, 삼킴 약화 및 사지 운동 장애와 같은 침 흘림 증상을 유발할 수 있습니다.

비장은 혈액 순환과 변화를 관장하며, 기(氣)와 혈액 생화학의 원천이자 후천적 능력의 기초 역할을 합니다. 내장, 팔, 다리를 연결하는 인체 경락은 기와 혈액을 순환시키고 상하로 소통하며 음과 양을 조절하는 통로입니다. Ren 경락을 마사지하면 신장 기능을 향상시키고 기와 혈액을 조절할 수 있습니다. 마사지 기술에서 발 태음의 비장 경락, 발 양밍의 위 경락, 손 양밍의 대장 경락에 경혈을 사용하면 비장과 위장 기능이 향상되어 기와 혈액의 순환을 촉진하는 데 도움이 됩니다. 마사지는 경락, 특정 부위 및 경혈을 사용하여 어린이의 몸에 양성 물리적 자극을 제공하여 표면에서 내부로, 외부에서 내부로 반응성 변화를 일으켜 국소 및 전체 혈액 순환을 개선하고 뇌의 정상적인 흥분 및 억제를 회복하며 내장 및 조직 혈액 기능의 해당 균형을 달성합니다. 이 이론에 따르면 우리는 주로 복부, 중완(RN12), 천수(ST25), 관우(CV4), 치하이(CV6)와 같은 경혈에 마사지를 사용합니다. 복 부 마사지는 뇌 17,18,19를 가진 소아의 임상 증상을 개선할 수 있으며^, 뇌-장 경로(²⁰)를 통해 뇌 손상 복구를 촉진할 가능성이 높다. 비장과 위는 산후 발달의 기초이기 때문에 비장을 강화하고 위장에 도움이 되며 기와 혈액을 보충하여 뇌 손상 회복을 촉진할 수 있습니다.

우리는 가능한 한 많이 CP에 대한 TCM의 개입을 시뮬레이션하기 위해 쥐에게이 기술을 복제했으며 복부 마사지가 CP 쥐의 기능 장애를 개선 할 수 있음을 발견했습니다. 요약하면, 우리는 복부 마사지를 통해 CP를 개선하는 관련 메커니즘을 조사하기 위해 복부 마사지를 연구하는 일련의 방법을 제시합니다. 많은 마사지 장르가 존재하기 때문에 마사지 메커니즘을 연구하는 것이 매우 어렵기 때문에 마사지 방법을 표준화할 필요가 있습니다.

프로토콜

상하이 푸단대학교 부속 진산병원 동물윤리위원회는 이 연구를 승인했다. Young Sprague Dawley (SD) 쥐는 08:00부터 20:00까지 빛, 20:00부터 08:00까지 어둠, 22 °C에서 온도 조절, 40%-50%의 실내 상대 습도가 있는 SPF 동물실에서 사육되었습니다. 그들은 음식과 물을 자유롭게 구할 수 있었습니다. 모든 동물실험은 실험동물의 복지윤리 및 동물실험안전규정을 준수한다.

1. 신생아 저산소성 허혈성 뇌병증 동물모델 ²¹

1. 생후 7일(P7)의 Sprague Dawley(SD) 쥐 수컷 새끼 18마리를 무작위로 sham(마사지 없음), 모델 및 마사지(모델 + 마사지 그룹)(각 그룹당 n = 6) 그룹으로 나눕니다.
2. 마취
   1. 작은 동물 가스 마취 기계를 사용하여 5% 세보플루란 가스를 투여하고 산소 유량을 4로 조정하고 4% 유도 분율을 사용하여 어린 쥐를 마취합니다. 어린 쥐가 등을 대고 누워있을 때, 팔다리가 움직이지 않고, 만져도 반응이 없고, 근육이 이완되는 시점을 기다려 동물이 완전히 마취되었는지 확인합니다.
   2. 마취된 어린 쥐에게 애완 동물 눈 연고와 안약을 넣어 안구 건조를 방지하십시오.
3. 현미경 수술 과정
   1. 먼저 요오드포어로 쥐의 목 피부를 한 번 소독한 다음 75% 에탄올로 한 번(이 절차를 세 번 수행) 어린 쥐의 목 중앙에 ~0.5cm 길이로 세로로 절개합니다. 우측 피하조직을 수동적으로 분리하고 총경동맥을 노출시킵니다.
   2. 모델 및 마사지 그룹: 총경동맥과 미주신경을 조심스럽게 분리합니다(그림 1A). 총경동맥을 쪼갠 후 전기응고총으로 총경동맥을 응고시킨다. 출혈이 없는지 확인한 후 피부를 층별로 봉합하고 수술 절개 부위를 다시 소독합니다(그림 1C).
   3. 가짜 그룹(CP 없음, 마사지 없음): 혈관 치료 없이 총경동맥만 분리합니다. 피부를 층층이 봉합하고 수술 절개 부위를 다시 소독합니다. 어린 쥐가 제한 없이 기어 다니는 것을 관찰할 때 어린 쥐를 어미 쥐 옆에 다시 놓습니다.
4. 수술 후 요오드로 소독하십시오. 수술을 마친 쥐를 37°C의 절연 패드에 올려놓고 상처에서 출혈이 있는지, 눈에 염증이 있는지 지속적으로 관찰합니다.
5. 어린 쥐의 모델과 마사지 그룹을 열린 저산소증 챔버에 놓고 깨어날 때까지 1시간 동안 관찰합니다.
   알림: 어린 쥐가 자유롭게 기어 다닐 수 있으면 저산소증 치료를 받을 준비가 된 것입니다.
6. 저산소증 치료
   1. 마취에서 회복된 후 어린 쥐를 37°C의 밀폐된 무산소 장치에 92% N2 및 8%_O2 가스 조건(2L/min)으로 3시간 동안 저산소증 상태로 둡니다. 저산소 치료 후 깨어난 어린 쥐를 어미 쥐 옆에 다시 놓습니다.
   2. 수술 기구를 소독하고 저산소 챔버를 알코올로 닦습니다. 수술 후 어린 쥐를 요오드포어로 소독하고 매일 상처에 감염 징후가 있는지 모니터링하고 멸균 패딩을 사용하십시오. SPF 동물실에서 전체 수술 과정을 완료하고 동물을 SPF 동물실에 보관합니다.
   3. 개입 조치 없이 모델을 성공적으로 설정한 후 모델 그룹을 정상적으로 올립니다. 모델링 완료 후 마사지 그룹에 수동 개입을 적용합니다.
      참고: 가짜 그룹은 정상적으로 먹이를 먹었고 저산소증 치료를 받지 않았습니다.
7. 각 그룹의 쥐를 멸균 및 고온 멸균 침구 위에 어미 쥐 옆에 놓습니다. 어미 쥐가 새끼 쥐에게 먹이를 줄 때까지 1-2시간 동안 관찰하십시오. 상처에서 피가 나는지, 눈에 염증이 있는지 확인하기 위해 매일 관찰하십시오. 상처가 완전히 아물 때까지 관찰하십시오.

2. 마사지 기술 매개 변수

알림: 마사지의 핵심 기술에는 주요 중재 기술로 누르기와 문지르기가 포함됩니다. 실험에 앞서 연구진은 톈진의 복부 마사지 전문가 왕징구이(Wang Jingui)로부터 기술을 수집한 기술 테스터의 작업을 활용했다.

1. 누르는 힘과 문지르는 힘을 각각^6N과 3N으로 설정합니다(22,23,24,25).

3. 마사지 조작

알림: 경혈에 대한 연구원의 엄지손가락 압력이 안정적이고 오래 지속되는지 확인하십시오.

1. 수술 후 둘째 날(P8)에는 어미 쥐를 방해하지 않고 어린 쥐를 케이지 밖으로 꺼냅니다. 마사지 그룹에서는 생후 8일째부터 40^일째까지 쥐를 마사지합니다.
2. 어린 쥐를 마사지하기 전에 손을 약간 문질러 어린 쥐의 피부와 거의 같은 온도로 따뜻하게 합니다.
3. 이 마사지 순서를 따르십시오 : 사지 경혈 → 복부 경혈 → 복부.
4. 어린 쥐를 왼손 손바닥에 놓고 네 손가락의 실 표면으로 어린 쥐의 등등을 머리에서 꼬리까지 1분 동안 부드럽게 만지면 조용해집니다.
5. 다음 문지르기 단계를 수행하십시오.
   1. 오른쪽 엄지와 검지의 복부를 앞뒤로 문지릅니다.
   2. 앞다리를 근위 끝에서 말단 끝까지 ~30초 동안 문지릅니다. Quchi(LI11), Waiguan(SJ5) 및 Hegu(LI4) 지점을 매번 1초 동안 10번 누릅니다.
   3. ~30초 동안 뒷다리를 근위부에서 말단부로 문지르고 Yanglingquan(SP9), Zusanli(ST36), Sanyinjiao(SP6) 및 Taichong(LR3) 포인트를 총 ~1분 동안 매번 1초 동안 5배 누릅니다.
6. 오른쪽 엄지 손가락을 사용하여 Zhongwan(RN12), Tianshu(ST25), Guanyuan(CV4) 및 Qihai(CV6)를 누릅니다. 각 경혈을 10분 동안 ~1초 동안 매번 1번 누릅니다.
7. 어린 쥐를 엎드린 상태로 유지하고 오른손 엄지손가락으로 복부의 중완 지점을 누르고 문지릅니다. 어린 쥐의 배꼽을 중심으로 엄지손가락을 사용하여 시계 방향으로 ~5분 동안 분당 120배 움직입니다.
8. 마지막으로 오른손 네 손가락의 실 표면을 사용하여 어린 쥐의 머리를 꼬리에 부드럽게 대고 조용히 한 다음 다시 새장에 넣고 어미 쥐가 먹이를 먹도록 합니다.

4. 경혈 국산화

참고: 2주 이내에 태어난 쥐의 경우 쥐의 체중과 길이는 쥐의 체중과 길이와 동일합니다. 따라서, 관련 문헌에 있는 쥐 마사지 방법을 사용하여 쥐의 8-15일 동안 쥐를 마사지하였다²⁴.

1. 2주에서 40일 후, LI11, SJ5, LI4, SP9, ST36, SP6, LR3, RN12, ST25, CV4 및 CV6²⁶을 사용하여 정기적인 쥐 마사지로 쥐를 치료합니다.
   참고: 표 1 및 다른 곳에서 쥐 경혈 국소화에 대한 자세한 설명²⁶ 및 경혈의 특정 위치에 대해서는 그림 2 를 참조하십시오.

5. 체중 및 행동 테스트

1. 매일 P7에서 P40까지 어린 쥐의 무게를 잰다.
2. P37에서 P40까지의 밸런스 빔에 대한 거동 실험을 수행합니다. 밸런스 빔(길이 35cm, 너비 1.5cm, 높이 100cm)을 사용하여 어린 쥐의 운동 균형 기능을 테스트합니다.
   1. 어린 쥐를 밸런스 빔에 놓고 밸런스 빔의 다른 쪽 끝에 있는 검은색 상자에 넣으십시오.
   2. P37-P39에서 어린 쥐를 대상으로 하루 3회, 밸런스 빔 훈련을 실시하고 P40에서 테스트를 실시합니다. 세 그룹의 어린 쥐가 균형 빔을 통과하는 시간과 뒷다리가 미끄러지는 횟수를 기록합니다(그림 1D).
      알림: 이산화탄소 질식 방법을 사용하여 쥐를 안락사시키십시오.

토론

허혈과 저산소증의 신생아 쥐 모델은 뇌성마비 27,28,29,30을 연구하기 위한 가장 고전적인 모델이다. 우리는 8^일에서 40일까지 쥐에 개입했는데, 이는 인간의 성장과 발달의 황금기인 3개월에서 11.5세까지 인간을 방해하는 것과 거의 같습니다³¹. 결과는 마사지가 뇌성 마비 기능 장애를 개선하는 효과적인 방법임을 나타냅니다. 이전의 동물 실험은 마사지가 CP^14,32를 가진 어린 쥐의 염증을 줄이고 운동 및인지 기능을 향상시킬 수 있음을 보여주었습니다. 일부 임상 연구에 따르면 등과 방광 경락 마사지는 CP³³ 소아의 운동 기능을 향상시킵니다. 이 결과는 또한 마사지가 뇌성마비를 가진 어린 쥐가 밸런스 빔을 통과하는 시간을 단축하고 뒷다리의 미끄러짐 횟수를 줄일 수 있음을 보여줍니다. 따라서 복부 마사지는 CP가 있는 어린 쥐의 운동 기능을 향상시킬 수 있음을 알 수 있습니다.

한의학에서는 뇌성마비를 선천성 신장 기(至氣) 결핍을 근본인자로, 후천성 비장(脾臟)과 위장 약화(胃能行)를 촉진 인자로 삼아 5가지 지연 증상과 5가지 연성 증상에 속한다고 믿고 있다. 신장은 뼈를 다스리고 골수를 생성하므로 신장에 기가 가득 차면 골수가 풍부해지고 지능이 정상으로 유지됩니다. 비장은 근육과 팔다리를 조절하기 때문에 비장이 건강하면 근육이 튼튼해지고 관절이 자유롭게 움직입니다. 따라서 비장을 보충하고 신장을 강화하고 위장 기능을 개선하고 팔다리와 관절을 움직이고 기능을 향상시킬 필요가 있습니다. 첫째, 한의학은 복부가 모든 질병의 근원이라고 주장한다. 복부 마사지는 위아래를 맑게 하고, 음과 양을 분리하고, 낡은 것을 제거하고 새로운 것을 만들고, 오장을 풍부하게 하고, 외부 악을 몰아내고, 내부 질병을 제거할 수 있습니다. 둘째, 연구에 따르면 뇌성마비 아동은 체중이 적고 과도하거나 불균형한 섭취량, 에너지 또는 영양 상태를 포함한 영양실조에 걸리기 쉽다고 한다^34,35,36,37. 성장 지연과 영양실조는 뇌성마비 소아에서 흔히 발생하며, 더 심각한 운동 기능 장애와 직접적인 관련이 있다³⁷. 영양실조의 위험은 CP^34,38,39 환자의 예후와 밀접한 관련이 있다. 오늘날 복부 마사지의 주요 연구 분야는 기능성 소화 불량, 변비, 설사 및 유아 식욕 부진과 같은 위장관 증상을 개선하는 것입니다 33,40,41,42. 결국, 수많은 연구에 따르면 Zhongwan, Tianshu, Guanyuan 및 Qihai를 자극하면 위장 질환을 치료하고 흡수를 촉진하며 영양 상태를 개선할 수 있습니다^43,44,45. 복부는 위장 관련 질병을 치료하고, 중추 에너자이저의 기 메커니즘을 빗질하고, 1차 기의 힘을 보충하고, 기와 혈액의 생화학을 촉진할 수 있습니다. 따라서 우리는 CP가 있는 어린 쥐의 운동 기능 장애를 개선하기 위해 실험 방법에 복부 마사지를 도입했습니다.

복부 마사지는 주로 복부와 결합되며 Quchi 및 Zusanli와 같은 사지 지점으로 보완됩니다. 사지 경혈의 외부 측부와 관절은 내부 장기와 연결되어 있으며 복부 마사지를 사용하여 최상의 치료 효과를 얻을 수 있습니다. 한편, 실험 동물 연구는 저산소성 허혈성 CP를 가진 신생아 쥐의 침술 Zusanli가 CP⁴⁶을 가진 어린 쥐의 기능을 향상시킬 수 있음을 보여줍니다. 한편, 임상 연구에 따르면 Hegu 47 및 기타 경혈의 침술은 CP의 발달을 효과적으로 향상시킬 수 있습니다. Quchi와 Zusanli는 사지 마비를 개선하기 위해 중국에서 뇌졸중 임상 치료에 가장 일반적으로 사용되는 경혈인 Somatostin⁴⁸의 Yang-Ming 대장과 Foot-Yang-Ming 경락 ⁴⁹의 경혈입니다. ⁵¹. 또한 Quchi와 Zusanli는 각각 대장과 위 경락의 합류 지점입니다. 이 지점에서 경락의 기(氣)는 내장에 도달하여 상부와 하부, 경락과 측부와 연결된다. 또한, 침술과 뜸 병용 마사지는 임상연구 결과에서 뇌성마비 아동의 뇌성마비 개선에 더 나은 효과를 보였다⁵². 요약하자면, TCM 요법은 CP 환자의 기능 장애를 개선하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마사지가 CP를 향상시킬 수 있는 방법에 대한 많은 연구가 있었지만 마사지 기술의 다양성은 엄청난 도전이 되었습니다. 많은 마사지 학교가 있으며 강도, 방향 및 기타 요인의 차이로 인해 많은 문제가 발생합니다. 우리는 다양한 마사지 방법을 배우고 간단하고 쉬운 마사지 기술을 탐구했습니다. 그러나 다양한 마사지 기술을 시뮬레이션할 수는 없습니다. 둘째, 마사지 시간은 어린 쥐의 발달에 중요한 단계입니다. 그 무게와 다양한 신체 시스템의 급속한 성장으로 인해 여러 단계의 쥐에 대한 손가락 힘의 지속적인 변화로 이어집니다. 마사지의 안정성을 연구하기 위한 노력은 계속되어야 한다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal anesthesia machine	RWD OF SCIENCE	R550
Experimental gloves	Sri Trang Gloves (Thailand) Co.,Ltd	0169
Isoflurane	RWD OF SCIENCE	R510-22-10
Rat	Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd.
YF-3 manipulation tester	Developed jointly by Shanghai Fudan University and Shanghai University of Traditional Chinese Medicine		Patent number of the People's Republic of China (ZL200710187403.1)