개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

요약

이 프로토콜은 근치적 전립선 절제술 표본에서 샘플 수집을 용이하게 하는 방법을 설명합니다. 목표는 해부병리학적 기준에 따라 표본의 조직 샘플을 Biobank에 저장하기 전에 매핑, 특성화 및 미시적 매크로 절개하는 것입니다.

초록

신선하고 특성이 잘 규명된 종양 조직 샘플을 획득하는 것은 고품질 "오믹스" 연구를 수행하는 데 매우 중요합니다. 그러나 전립선암(PC)의 경우 이 장기의 고유한 특성과 이 종양과 관련된 높은 이질성으로 인해 특히 어려울 수 있습니다. 다른 한편으로는, 중요한 조직 변화를 일으키지 않고 보관하기 전에 샘플을 조직병리학적으로 특성화하는 것도 흥미로운 도전입니다. 이러한 맥락에서 우리는 해부병리학적 기준에 따라 절제된 전립선 조직을 획득, 매핑, 특성화 및 미세 절제하는 새로운 방법을 제시합니다.

이전에 발표된 프로토콜과 달리 이 방법은 전립선 표본의 구조를 손상시키지 않으면서 전립선 표본의 조직 병리학적 분석에 필요한 시간을 줄여주며, 이는 수술 마진을 평가하는 데 중요합니다. 또한 Gleason 점수, 전구체 병변(고급 전립선 상피내 종양 - PIN) 및 염증성 병변(전립선염)과 같은 병리학적 기준에 의해 정의된 조직학적 종양 영역에 중점을 두고 새로운 전립선 조직 샘플의 묘사 및 미시적 거시적 해부를 가능하게 합니다. 그런 다음 이 샘플은 후속 연구 분석을 위해 바이오뱅크에 저장됩니다.

서문

전립선암(PC)은 전 세계적으로 남성에서 2^번째로 흔한 암이며 5^번째 주요 사망 원인입니다¹. 환자의 치료 및 예후는 종양의 병기 및 등급(Gleason 점수)에 따라 달라지며, 이는 국소 및 저등급 종양(Gleason 등급 6)의 5년 생존율(99%)이 높은 Gleason 등급 및 전이성 종양(31%)^에 비해 더 높다는 사실에서 입증되었습니다2.

PC 국소 재발 및 치료 실패는 이 종양 유형³의 특징적인 높은 유전적 종양 내 이질성과 관련이 있습니다. 또한, PC는 다양한 형태학적, 조직학적, 분자^{적 특성을 보이는} 여러 종양 병소를 가진 다초점 질환으로 간주되며4, 이는 독립적으로 발생하거나 공통 종양 세포 조상에서 유래할 수 있다⁵. 이전 연구에서는 전이를 촉진하거나 세포 계통을 전립선에 국한시킬 수 있는 특정 유전적 요인에 따라 환자마다 종양 진화가 다르다는 것을 보여주었다⁵. 따라서 다양한 종양 병소의 분자 특성 분석은 보다 정확한 진단과 예후....

프로토콜

이 방법은 다양한 임상 서비스(비뇨기과, 병리학 및 La Fe Hospital Biobank)와 관련된 협업 노력을 통해 개발되었습니다. 이 연구는 인간 복지에 대한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며, 스페인 발렌시아 La Fe Universitario y Politécnico Hospital Instituto de Investigación Sanitaria Hospital의 생물의학 연구 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 모든 샘플은 La Fe Hospital Biobank(PT13/0010/0026)에 보관되었습니다. 전체 절차는 그림 1에 자세히 설명되어 있습니다.

그림 1: 전체 절차 체계. 프로토콜 섹션에 설명된 단계별 절차의 개략도입니다.

토론

모든 연구에서 양질의 샘플을 얻는 것은 체계적 편향을 줄이고 신뢰할 수 있는 결과를 얻기 위한 필수 요건입니다²². 따라서 시료가 처리 및 보관되는 온도, 시료 채취에서 보관까지 경과된 시간, 멸균 물질의 사용 또는 방부제 또는 기타 첨가제의 첨가가 시료에 미칠 수 있는 영향과 같은 사전 분석 변수의 제어는 생물학적 시료와 관련된 모든 프로토콜에서 고려되어야 합니다. ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169