Trypanosoma evansi-Infected Mice의 Allodynia 및 통증을 평가하기 위해 Mouse Grimace Scale과 관련된 Electronic von Frey

요약

여기에서는 Trypanosoma evansi에 감염된 마우스의 통각을 평가하기 위한 프로토콜을 제시하며, 전자 von Frey 장치를 도구로 사용하여 뒷발과 내장의 기계적 역치를 측정합니다.

초록

감염성 질환 발병기전은 여전히 연구해야 할 복잡한 분야입니다. 이질증 및 통증과 같은 여러 임상 징후의 경과가 가축에서 관찰 될 수 있습니다. 그러나 그들의 경로와 올바른 치료에 대한 지식은 통제된 실험을 필요로 하며, 그 중 많은 부분이 실험실 동물을 사용합니다. 뒷발과 내장의 기계적 역치 변화를 측정하는 것은 설치류의 통증 인식 변화를 관찰하는 데 유용한 기술입니다. 철수 반응은 기준선 테스트에서 먼저 측정할 수 있으며, 이는 실험 그룹을 더 잘 제어할 수 있도록 합니다. 감염을 유도하고 프로토콜에 약물을 추가한 후 후속 검사를 수행할 수 있습니다. 통증과 같은 변화를 관찰하기 위해 안면 척도 사용과 관련된 전자 von Frey 장치를 사용하면 마우스의 이질증 및 통증을 평가하기 위한 간단하고 정확하며 일관된 평가가 가능합니다. 따라서, 트리파노소마 에반시 감염에 대한 본 방법론을 사용한 실험은 실험실 감염 동물에서 이질증 및 통증을 평가하는 유용한 방법을 나타내며, 이는 가축 동물에 대한 기존 치료에 적용될 수 있다.

서문

트리파노소마 에반시(Trypanosoma evansi)는 남아메리카에서 "수라(surra)" 또는 "말-다스-카데이라스(mal-das-cadeiras)"라고 불리는 질병의 원인이다 ^1,2. 이 병은 일반적으로 말과 소에 영향을 미치지만, 야생 동물군에도 영향을 미치며, 혈구박쥐, 타바니드, 기공파리에 의해 전염된다 ^1,3. Surra는 가축의 주요 질병으로 올바른 치료가 없을 경우 치명적일 수 있으며 빈혈, 식욕 및 체중 감소, 근육 약화 및 유산과 같은 비특이적 임상 징후를 나타낼 수 있으며 이는 숙주 및 지리적 지역에 따라 다를 수 있습니다 2,4,5,6.

질병이 진행되는 동안 감염된 동물에서 이질증과 통증의 발현은 여전히 새로운 주제입니다

프로토콜

모든 실험은 10주 된 성인 암컷 스위스 마우스(35-55g)를 사용하여 수행되었습니다. 동물들은 온도 조절(21 ± 1 °C), 12시간 빛/12시간 어두운 주기, 표준 실험실 차우 및 물 광고 리비텀이 있는 방에서 폴리설폰 케이지(케이지당 3-5마리)에 수용되었습니다. 약물 치료의 일관된 효과를 입증하기 위해 모든 테스트에서 각 그룹에 10마리의 동물을 할당했습니다. 실험 설계는 Santa Catarina State University(CEUA) 윤리 위원회(프로토콜 번호: 6019201123)에 의해 제출되고 승인되었습니다. 모든 동물실험은 ARRIVE(Animal Research: Reporting of in vivo Experiments)를 준수하였으며, 국가연구위원회(National Research Council)의 '실험동물의 관리 및 사용에 관한 지침'에 따라 수행되었다.

1. 트리파노소마 에반스 준비 및 접종

주의: 감염된 혈액 샘플, 시약 및 기타 화학 화합물을 다룰 때는 일회용 실험실 가운, 장갑, 마스크 및 보안경을 착용하십시오.

1. 수조 장비를 켜고....

결과

T. evansi 감염으로 인한 기계적 역치 감소는 오른쪽 뒷발과 내장 조직 모두에 대한 전자 von Frey 장치로 평가되었습니다.
실험은 사용 가능한 T. evansi 샘플²와 관련된 이전 데이터에 따라 5일에 걸쳐 수행되었습니다. 감염된 마우스는 감염 후 3일째에 오른쪽 뒷발의 기계적 역치에서 유의미한 차이를 보이기 시작했으며 감염되지 않은 마우스에 비해 감염 .......

토론

감염된 동물을 대상으로 한 실험에서 중요한 단계는 기생충혈증 수치를 조절하는 것입니다. T. evansi의 다른 균주는 마우스에서 다양한 방식으로 작용할 수 있으며, 급성 감염에서 만성 감염으로 이어질 수^있습니다 2,4,5,6. 또한, 감염 용량의 변화는 마우스의 생존 시간을 줄이거나 연장할 수 있?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
26 G 1/2" needle coupled to insulin syringe	TKL	80288090100	Used to infund solutions on laboratory animals
Accessories for von Frey analgesimeter	INSIGHT	EFF 303	Containment box with support for digital analgesimeter assessment
D-(+)-Glucose	SIGMA-ALDRICH	G7021	A monosaccharide which is the main source of energy in the form of ATP for living organisms
Digital analgesimeter	INSIGHT	von Frey Wi-Fi	The von Frey Wi-Fi is a portable device used to assess tissue sensitivity to mechanical stimuli
Gilson type 10 µL polypropylene tip	CRALPLAST	18261	Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for hind paw allodynia assessment
Laboratory water bath	BEING INSTRUMENT	BW-22P	Used to heat liquid and semi-solid substances contained in appropriate recipients to specific temperature
Phosphate buffered saline	SIGMA-ALDRICH	806552	A balanced salt solution buffer used for a variety of cell culture applications
Swiss mice (Mus musculus) from both gender	UFSC	Swiss Webster	Laboratory animals used for controlled experiments
Trypanosoma evansi cryiopreserved sample	UDESC	-	Sample used to infect all mice, ceded by the Hemoparasites and Vectors Biochemistry Laboratory
Universal type 10 µL polypropylene tip	CRALPLAST	18171	Polypropylene to be used on eletronic von Frey apparatus, recommended for visceral allodynia assessment