Slipper Limpet, Crepidula fornicata의 유충의 실험실 및 현장 배양

요약

이 논문은 복족류 Crepidula fornicata 의 유충 배양 방법을 소량의 실험실 규모 시스템과 현장에 배치할 수 있는 주변 해수 중우주 시스템에서 제시합니다.

초록

꽃받침 복족류 연체 동물, Crepidula fornicata는 유충 발달 생물학, 생리학 및 생태학 연구에 널리 사용되었습니다. 이 종의 육화된 벨리거 유충은 성충에 의해 자연 방출된 후 체에 사이펀하여 수집하고, 200/L의 밀도로 배양에 배포하고, 1 x 10⁵ cells/mL의 Isochrysis galbana(균주 T-ISO)를 공급했습니다. 주변 공기 또는 정의된 대기 가스 혼합물에 대한 평형을 위해 설계된 환기가 가능한 800mL 배양에서 사육된 형제 유충에 대해 껍질 성장 및 변태 능력 획득이 문서화되었습니다. 이러한 실험실 배양 조건과 대조; 성장 및 역량 데이터는 또한 생식 가능한 성인의 현장 개체군에 위치한 15L 유동 주변 해수 중간우주에서 사육된 유충에 대해 수집되었습니다. 실험실 배양에서 변성 능력의 성장 속도 및 시기는 이전에 발표된 연구에서 보고된 것과 유사했습니다. 현장에서 자란 유충 중우주는 실험실 연구에서 보고된 것보다 훨씬 더 빨리 성장하고 더 빨리 변태했습니다. 이러한 방법은 실험실에서 미리 결정된 통제된 조건뿐만 아니라 현장에서 자연적으로 발생하는 조건 하에서 유충 발달을 탐색하는 데 적합합니다.

서문

슬리퍼 절름발이, Crepidula fornicata (복족류 : Calyptraeidae)는 발달 모델로서의 유용성과 침입 종으로서의 광범위한 영향으로 인해 현재 및 역사적 연구 문헌에 잘 표현되어 있습니다. 이는 고전적 실험^발생학(experimental embryology)1 시대에 나선형 발달의 기초적인 사례였으며, 로포트로코조아(lophotrochozoan)의 초기 발달 메커니즘을 해부하기 위해 현대 이미징 및 게놈 도구를 적용함으로써 관심의 재탄생을 경험했다 ^2,3. 그것의 생명 역사의 다른 쪽 끝에서, 다른 조사는 북아메리카 동부의 원래 분포에서 멀리 떨어진 온대 연안 해양 환경에서 이 생태계 공학자의 성인 개체군의 영향에 초점을 맞추었습니다 ^4,5. 배아와 성충 사이에서, 이 종의 벨리거 유충은 유충 발달 및 생태학에 대한 수많은 연구의 대상이었으며, 특히 성장과 변태 능력 획득에 영향을 미치는 요인, 유충 정착을 매개하는 내부 및 외부 신호, 유충 경험이 유년기 수행에 미치는 영향^....

프로토콜

1. C. fornicata의 유충 배양을 확립하고 유지하기 위한 일상적인 기동

참고: 이 방법은 방금 부화한 벨리거 유충을 방출한 성인 C. fornicata 가 들어 있는 바닷물 한 병(3.8L)으로 시작합니다. 성인은 현장에서 수집하거나 재료 표에 제공된 공급 업체로부터 얻을 수 있습니다. 성인은 짝짓기 스택에 사는 protandrous hermaphrodites이며 스택의 맨 아래에 고착 된 암컷이 있습니다. 성인 스택을 분해하지 마십시오. 번식의 계절성과 계절이 아닌 산란을 위해 성충을 조절하는 방법은 이전에 설명되었다¹⁷. 유충은 방출 후 2-3시간 이내에 가장 잘 수집되며, 이때 유충은 지리 음성이 강하고 항아리 표면 근처에 집중됩니다.

1. 400mL 삼중 모서리 일회용 플라스틱 비커의 바닥을 자르고 236μm 나일론 메쉬 패널에 붙여서 체를 만듭니다. 이러한 목적과 특히 중우주 건설(아래)을 위해 폴리에틸렌에 대한 접착력이 우수하도록 제조된 핫멜트 접착제를 사용하십시오.
2. 성인 항아리에서 통기를 제거하고 파편이 가라앉고 유충이 표면으로 쉽게 헤엄칠 수 있도록 15-....

토론

C. fornicata의 유충은 다른 플랑크토영양성 해양 유충에 비해 상대적으로 배양이 쉽지만, 좋은 배양 관행의 기본에 대한 관심은 여전히 필수적이다^17,19. 건강한 유충은 부화 직후에 먹이를 먹기 시작해야 합니다. 이것은 부화 다음 날에 조류 세포로 가득 찬 전체 내장을 투과 조명이 있는 해부 현미경을 사용하여 관찰함으로써 쉽게 확인할 수 있습?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bucket, Polyethylene, 7 gallon	US Plastic	16916	for mesocosm
Crepidula fornicata	Marine Biological Laboratory, Marine Resources Center	760	adult broodstock
Hotmelt glue, Infinity Supertac 500	Hotmelt.com	INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB	good for bonding polyethylene
Jar, glass, 32 oz, with polypropylene lid	Uline	S-19316P-W	for 800 mL ventilated cultures
Nitex mesh, 236 µm	Dynamic Aqua Supply Ltd.	NTX236-136	for mesocosm
Nut, hex, nylon, 10-32 thread	Home Depot	1004554441	for fastening tubing barbs
Rivets, nylon, blind, 15/64" diameter, 5/32"-5/16" grip range, pack of 8	NAPA auto parts	BK 6652844	4 packs needed per mesocosm
Tubing barb 1/8" x 10-32 thread	US Plastic	65593	2 needed per culture jar
Tubing, polyethylene, 2.08 mm OD	Fisher Scientific	14-170-11G	for ventilating gas stream inside culture jar
Tubing, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32"	US Plastic	57810	fits barbs for ventilating cultures